肌纖維ATPase染色液

產(chǎn)品簡介：

   三磷酸腺苷酶( adenosine triphosphatase，ATPase)是一種水解酶，是催化 ATP 合成的一種酶，三磷酸腺苷酶根據(jù)所用激活劑、抑制劑以及酶定位的不同分為膜性三磷酸腺苷酶、肌球蛋白三磷酸腺苷酶、線粒體三磷酸腺苷酶等。ATPase 能水解三磷酸腺苷為磷酸腺苷和磷酸，此酶只作用于磷酸與磷酸之間的高能鍵，因而釋放大量能量，其催化反應(yīng)如下：

A-P-P-P + H2O→A-P-P + H3PO4 +能量

肌纖維ATPase染色液的原理是三磷酸腺苷酶水解三磷酸腺苷為二磷腺苷和

磷酸，磷酸根與鈣離子結(jié)合為磷酸鈣沉淀，再依次被置換為磷酸鈷和硫化鈷，終產(chǎn)物為黑色硫化鈷沉淀，可區(qū)分 I(紅肌)、IIa(白肌)、IIb(白肌)。    

產(chǎn)品組成：

名稱                       規(guī)格            Storage

試劑(A): 酸性孵育液         50ml             4℃

試劑(B): 堿性孵育液         50ml             4℃

試劑(C): ATPase 孵育液      50ml             4℃

試劑(D): 鈣鹽溶液           100ml            RT

試劑(E): ATPase 鈷溶液      50ml             RT

試劑(F): BBTN 緩沖液        250ml            4℃

試劑(G): ATPase 硫化溶液    2×1ml           RT 避光

使用說明書 1 份

自備材料：

1、蒸餾水

2、恒溫箱

3、中性福爾馬林固定液

操作步驟(僅供參考)：

1、 取新鮮組織，低溫恒冷冰凍切片(用液氮快速冷凍效果更佳)，厚度6μm，連續(xù)切片貼于玻片上，分別命名為A玻片、B玻片，涼風(fēng)吹干30min。

2、 取A玻片浸入酸性孵育液，室溫孵育5min。

3、 取處理過的A玻片以及B玻片，分別浸入堿性孵育液室溫孵育30s、15min。

4、 將A玻片以B玻片浸入ATPase 孵育液，室溫孵育35~60min。

5、 入鈣鹽溶液浸洗 3 次，每次3min。

6、 入ATPase鈷溶液孵育3min。

7、 用BBTN 緩沖液洗滌4~5 次，每次1~2min，流水沖洗 1min。

8、 在上述過程中配制ATPase 硫化工作液，即取 ATPase 硫化溶液用蒸餾水稀釋50倍, 即為ATPase 硫化工作液，即配即用。

9、切片入硫化工作液，孵育 1min。

10、流水洗 10min，常規(guī)脫水透明，中性樹膠封固。

染色結(jié)果：

ATPase 主要呈黑色或棕黑色。

肌纖維類型       酸性孵育液       堿性孵育液

I(紅肌)            深                 淡

IIa(白肌)          淡                 深

IIb(白肌)         中度                深

注意事項(xiàng)：

1、 ATPase 孵育液、ATPase 硫化液易失效，好分成小分儲存，一經(jīng)開啟立即使用。

2、 ATPase 硫化液具有腐蝕性和刺激性氣味，應(yīng)小心操作。

3、 冰凍切片染色時，應(yīng)減少切片在室溫暴露的時間。

4、 染色效果與酸性孵育液、堿性孵育液、ATPase 孵育液的 pH變化有很大關(guān)系，盡量減少改變pH的因素，如避免反復(fù)開蓋、避免室溫放置過久等。

有效期：6個月有效。