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olympus熒光顯微鏡的應(yīng)用要點(diǎn)
olympus熒光顯微鏡是利用“光化熒光”成像，如果所選激發(fā)波長(zhǎng)在肉眼所看不見的近紫外光區(qū)(320～400nm)，熒光的發(fā)射光譜也較普通光鏡光源的平均波長(zhǎng)短，光學(xué)分辨率提高。高能量的光子與電子碰撞，使得電子從基態(tài)躍遷到激發(fā)態(tài)。激發(fā)態(tài)的電子很不穩(wěn)定，會(huì)重新回落到基態(tài)，這個(gè)過程中會(huì)消耗部分熱能，并發(fā)出新的光子。新的光子能量比起初的光子能量低，因此波長(zhǎng)更長(zhǎng)。由于新的光子波長(zhǎng)區(qū)別于入射光的光子波長(zhǎng)，通過一定的光學(xué)處理方法將兩束不同波長(zhǎng)的光分開，從而使我們只看到發(fā)射出來的新光子（熒光信號(hào)），也就是olympus熒光顯微鏡看到的熒光圖像。
olympus熒光顯微鏡的預(yù)檢查和調(diào)節(jié)：
(1)每次進(jìn)行熒光觀測(cè)前，必須例行檢查熒光裝置的燈絲對(duì)中、光路對(duì)焦、孔徑光闌、視場(chǎng)光闌設(shè)置等狀況。
(2)所需要的熒光激發(fā)/發(fā)射濾光片組件是否已裝在轉(zhuǎn)換器中，olympus熒光顯微鏡物鏡配置是否得當(dāng)，除去物鏡前透鏡的油漬和灰塵。
(3)如同時(shí)進(jìn)行透射光相差觀察，要檢查聚光鏡對(duì)中心及相差環(huán)與物鏡相反的共軛情況。
(4)檢查樣品載體(載玻片、蓋玻片和其他器皿)有否掛有液體、灰塵，厚度是否在物鏡標(biāo)定的工作距離范圍內(nèi)。切片樣品不能太厚，約≤10μm為宜。
(5)因照明光源含有紫外線，在載物臺(tái)前上方放一塊棕色遮光板，以防紫外線損傷視網(wǎng)膜。
(6)電壓不穩(wěn)會(huì)降低高壓汞燈的使用壽命，光源電源加配穩(wěn)壓器。
(7)為延長(zhǎng)汞燈壽命，在開啟后15min方可關(guān)閉；汞燈熒光電源一旦關(guān)閉，再次啟動(dòng)至少需等待10min，以使水銀蒸汽冷卻復(fù)至原態(tài)，否則會(huì)影響燈的壽命。
olympus熒光顯微鏡的像觀察：
(1)在開啟熒光燈源后約5～10min激發(fā)光強(qiáng)度趨于穩(wěn)定，裝載樣品進(jìn)行觀察；為防止在調(diào)焦和尋找物像過程中過度激發(fā)光照會(huì)造成樣品熒光淬滅，先通過縮小olympus熒光顯微鏡的孔徑光闌或加ND濾光片將激發(fā)光調(diào)節(jié)到適度強(qiáng)度，有規(guī)律地移動(dòng)樣品臺(tái)，待確定鏡像后，在調(diào)節(jié)到熒光狀態(tài)用于拍攝記錄。
(2)鏡像質(zhì)量不佳的調(diào)整。排除樣品制備因素外，可進(jìn)行的必要調(diào)節(jié)措施是：
?、倥懦上窆饴分械恼诠饣蛳薰馄骷?，如DIC附件、ND濾光片等。
?、谥匦抡{(diào)節(jié)olympus熒光顯微鏡的收光器對(duì)焦和孔徑光闌大小。
?、奂?xì)心調(diào)節(jié)olympus熒光顯微鏡物鏡覆蓋差校正環(huán)。
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