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人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細(xì)胞HK-2)細(xì)胞培養(yǎng)說明書

來源:上海研謹(jǐn)生物科技有限公司   2018年08月17日 17:13  

人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細(xì)胞HK-2)

貨號:HUCL-013

 

細(xì)胞介紹

該細(xì)胞屬源于正常腎的近曲小管細(xì)胞,通過導(dǎo)入HPV-16 E6/E7基因而獲得永生化。將含有HPV-16 E6/E7基因的重組的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體pLXSN 16 E6/E7轉(zhuǎn)染外生包裝細(xì)胞Psi-2,Psi-2細(xì)胞產(chǎn)生的病毒再去感染兼嗜性包裝細(xì)胞系PA317,后將PA317產(chǎn)生的病毒顆粒導(dǎo)入正常的腎皮質(zhì)近曲小管細(xì)胞。盡管pLXSN 16 E6/E7中含有新霉素抗性,但未用G418篩選轉(zhuǎn)導(dǎo)克隆。Southern和FISH分析顯示HK-2細(xì)胞來源于單克隆。PCR檢測證實(shí)HK-2細(xì)胞基因組中含有E6/E7基因。

 

細(xì)胞特性

1) 來源:正常

2) 形態(tài)上皮細(xì)胞

3) 含量:>1x106 個(gè)/mL

4) 污染:支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測為陰性

5) 規(guī)格:T75瓶或者1mL凍存管包裝

 

運(yùn)輸和保存:使用含有胎牛血清的2ml凍存管發(fā)送存活細(xì)胞。收到細(xì)胞后,1000RPM,常溫條件,離心5min后,潔凈操作臺棄去上清,加入推薦使用的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至10cm培養(yǎng)皿或者T75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),傳代達(dá)到細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),再進(jìn)行凍存。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。

 

細(xì)胞用途:僅供科研使用。

                       

細(xì)胞培養(yǎng)步驟

一.培養(yǎng)基培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1) 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H,GIBCO,貨號12800017,添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。(DMEM液體培養(yǎng)基:GIBCO,11995-065)

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液90%*培養(yǎng)基,10%DMSO現(xiàn)用現(xiàn)。液氮儲存。

二. 細(xì)胞處理

1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將細(xì)胞懸液加入10cm皿中,加入8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子PBS潤洗細(xì)胞1-2。

2. 加2ml消化液0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化

3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3)細(xì)胞凍存:細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO進(jìn)行凍存。

 

注意事項(xiàng):

1. 收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。

2. 所有動(dòng)物細(xì)胞均視為潛在的生物危害性必須在二級生物安全內(nèi)操作,并請注意防護(hù),所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

 

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