酶的提取和分離純化
(一)細(xì)胞破碎處理www.runwelltac.com
許多酶都存在于細(xì)胞內(nèi)。為了提取這些胞內(nèi)酶,首先需要對細(xì)胞進行破碎處理。細(xì)胞破碎的方法很多,主要包括機械破碎法、物理破碎法、化學(xué)破碎法和酶學(xué)破碎法等。機械破碎法是指利用搗碎機、研磨器或勻漿器等將細(xì)胞破碎。物理破碎法是指利用溫度差、壓力差或超聲波等將細(xì)胞破碎?;瘜W(xué)破碎法是指利用甲醛、丙酮等有機溶劑或表面活性劑作用于細(xì)胞膜,使細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)遭到破壞或透性發(fā)生改變。酶學(xué)破碎法是指選用合適的酶,使細(xì)胞壁遭到破壞,進而在低滲溶液中將原生質(zhì)體破碎。
(二)提取
酶 的提取是指在一定條件下,用適當(dāng)?shù)娜軇┨幚砑?xì)胞破碎后的含酶原料,使酶充分地溶解到提取液中的過程。酶的提取方法有過柱法、鹽溶液提取法、堿溶液提取法和有機溶劑提取法等。為了提高酶的提取率和防止酶提取后變性失活,提取過程中必須注意保持適宜的溫度和pH值,并且添加適量的保護劑。
(三)分離
提取液中含有多種酶,要想從提取液中分離純化出某一種酶,必須根據(jù)這種酶的特性,選擇合適的分離純化方法。酶分離純化的方法很多,可利用酶相對分子質(zhì)量的大小進行分離純化,如通過透析的方法分離酶等。
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