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SB203580可以競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合ATP結(jié)合位點(diǎn)，達(dá)到抑制p38MAPK的目的，作為p38MAPK特異性抑制劑被廣泛應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)研究。本研究通過p38MAPK抑制劑SB203580處理DC，檢測(cè)DC表面成熟分子表達(dá)、細(xì)胞因子分泌、抗原提呈能力、及其介導(dǎo)的CD4+-雞卵清蛋白轉(zhuǎn)基因小鼠(CD4+-ovalbumin transgenic mice)T細(xì)胞即OT-Ⅱ細(xì)胞特異性增殖的變化,闡述SB203580對(duì)小鼠脾臟DC功能的影響。
不同藥物干預(yù)組(rHu-EPO干預(yù)組、SB203580組、rHu-EPO+SB203580組)于術(shù)前半小時(shí)開始給予相關(guān)藥物皮下注射，以后每周給藥2次,共計(jì)給藥4周.各組術(shù)后連續(xù)3 d肌肉注射青霉素40萬U.1.3.3血流動(dòng)力學(xué)測(cè)定分別于術(shù)后24 h、2周、4周進(jìn)行大鼠血流動(dòng)力學(xué)測(cè)定.按前述方法麻醉動(dòng)物,分離右側(cè)頸內(nèi)動(dòng)脈,行右側(cè)頸動(dòng)脈插管,采用多導(dǎo)生理記錄儀記錄心率(HR)、頸動(dòng)脈收縮壓(SAP)、頸動(dòng)脈舒張壓(DAP)、左室收縮壓(LVSP)、左室舒張末期壓(LVEDP)、左室內(nèi)壓大上升和下降速率(±dp/dtmax)
SB203580低劑量組(5μmol/L)、SB203580中劑量組，加入不同濃度的SB203580,培養(yǎng)24 h后，加入NMDA,10 min后進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。MTT法測(cè)細(xì)胞生存力細(xì)胞接種于96孔培養(yǎng)板內(nèi),每組取8孔,細(xì)胞培養(yǎng)至第7天時(shí),經(jīng)NMDA和SB203580處理后的細(xì)胞,再培養(yǎng)24 h后,每孔加入20μmol/L MTT液,于37℃孵箱孵育4 h,取出,棄去培養(yǎng)液,每孔加入200μL DMSO,微量混勻器充分混勻,酶標(biāo)儀570 nm處讀取吸光度值。吖啶橙(acridine orange,AO)熒光染色法AO與細(xì)胞內(nèi)的DNA、RNA都有親和力,但結(jié)合后卻發(fā)出不同顏色熒光,DNA呈亮綠色,而RNA呈橘紅色或火紅色。細(xì)胞加樣品培養(yǎng)24 h后終止培養(yǎng),取出蓋玻片,0.01 mol/L PBS振洗5 min，置于分析純甲醇中劉學(xué)文,等.p38MAPK磷酸化水平及Caspase-3在NMDA誘導(dǎo)的體外培養(yǎng)神經(jīng)元中的激活及SB203580的保護(hù)作用53固定10 min后取出，揮干甲醇。取1 g吖啶橙溶于100 mL生理鹽水中，配成1%的母液4℃保存?zhèn)溆?，使用時(shí)用0.1 mol/L PBS(pH 4.8)稀釋成0.01%工作液。
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