化學(xué)發(fā)光酶標(biāo)儀的單雙波長測量方法你了解嗎？
　　在用酶聯(lián)免疫法測定抗原或抗體時(shí)，不論是定量試驗(yàn)還是定性試驗(yàn)都要求使用化學(xué)發(fā)光酶標(biāo)儀進(jìn)行測定。一般的化學(xué)發(fā)光酶標(biāo)儀在測定中均有單波長和雙波長的模式，并且采用的都是垂直光路。但在日常工作中有時(shí)會(huì)不太重視單波長和雙波長的選擇，對使用單、雙波長給測定結(jié)果帶來的較大差異也不很了解，今天咱們就來了解一下這兩個(gè)測量方法。
　　化學(xué)發(fā)光酶標(biāo)儀與分光光度計(jì)、自動(dòng)生化分析儀等的吸光度測定有所不同，一般分光光度計(jì)是水平光路，而化學(xué)發(fā)光酶標(biāo)儀則是垂直光路，但測定原理相同，都是使用朗伯-比耳定律，測定的都是樣本的吸光度。垂直光的特點(diǎn)是標(biāo)本吸光度受液體濃縮或稀釋的影響小，不足之處是受被測樣本液面是否水平、酶標(biāo)板透光性、孔底是否平整等的影響較大。
　　化學(xué)發(fā)光酶標(biāo)儀在用單波長測定吸光度時(shí)，除受到測定干擾（樣本的濁度、干擾色等）和電路干擾（包括噪音、漂移、電壓等）等因素外，受液體表面張力的影響也很大。在檢測過程中，由于液體表面張力的作用，液體的表面不是一個(gè)平面，而是形成一個(gè)凹面，從側(cè)面看似凹透鏡，這樣不可避免會(huì)影響光路的正常通過。由于凹液面的影響，光線在通過液體時(shí)，除正常被液體吸收一部分外，尚有部分被折射和反射（如光線通過凹透鏡那樣），影響吸光度的檢測。而化學(xué)發(fā)光酶標(biāo)儀使用的又是通過光導(dǎo)纖維傳播的點(diǎn)光源，如果每次能在同一部位檢測，吸光度的重復(fù)性將得到保證，但由于機(jī)械運(yùn)動(dòng)等造成的誤差，不可能保證每孔都在相同部位被檢測，因此造成了孔與孔之間有一定的差異。
　　在雙波長測定中，減少了測定干擾和電路干擾，因此測定結(jié)果比單波長測量明顯好轉(zhuǎn)。
　　由于液體表面張力的不同，導(dǎo)致單波長測定時(shí)的誤差較大。并且用不同的洗滌劑會(huì)影響到后加入底物和終止液后的液面情況，用加入表面活性劑的洗滌液清洗后，形成的液面更凹，對單波長檢測的影響更大，并且與表面活性劑的濃度成正比。而且中性蒸餾水洗滌后，單、雙波長檢測的結(jié)果基本一致。
　　利用雙波長檢測，不會(huì)影響檢測靈敏度。建意在進(jìn)行酶聯(lián)免疫檢測時(shí)，化學(xué)發(fā)光酶標(biāo)儀比色應(yīng)該優(yōu)選雙波長。這樣可以提高臨界值處標(biāo)本的分析正確度，減少實(shí)驗(yàn)誤差。