在人elisa試劑盒中,用作固相載體的小珠一般為直徑0.6cm的圓珠,表面經(jīng)磨砂處理后吸附面積大大增加。ELISA板孔的吸附面積約為200mm2,小珠均為1000mm2,將近ELISA板孔的5倍。吸附面積的增大即意味著固相抗原或抗體量的增加。再者,球型小珠的表面弧度更有利于吸附的抗原決定簇或抗體結(jié)合位點的暴露面處于反應狀態(tài),因此珠式ELISA的反應往往更為靈敏。小珠的另一特點是更易于使洗滌*,使用特殊的洗滌器,使小珠在洗滌過程中滾動淋洗,其洗滌效果遠較板孔的浸泡式為好。但由于磨砂工藝的難度較大,小珠的均一性較差。
固相載體在ELISA試劑盒測定過程中作為吸附劑和容器,不參與化學反應??勺鱁LISA中載體的材料很多,zui常用的是聚苯乙烯。聚苯乙烯具有較強的吸附蛋白質(zhì)的性能,抗體或蛋白質(zhì)抗原吸附其上后仍保留原來,加之它的價格低廉,所以被普遍采用。聚苯乙烯為塑料,可制成各種形式。
良好的ELISA板應該是吸附性能好,空白值低,孔底透明度高,各板之間、同一板各孔之間、同一板各孔之間性能相近。聚苯乙烯ELISA板由于原料的不同和制作工藝的差別,各種產(chǎn)品的質(zhì)量差異很大,因此,每一批號的ELISA板在使用前須事先檢查其性能。常用的檢查方法為:ELISA試劑盒以一定濃度的人IgG(一般為10ng/ml)包被ELISA板各孔,洗滌后每孔內(nèi)加入適當稀釋度的酶標抗人IgG抗體,保溫后洗滌,加底物顯色,終止酶反應后,分別測每孔溶液的吸光度??刂品磻獥l件,使各孔讀數(shù)在吸光度0.8左右。計算全部讀數(shù)的平均值。所有單個讀數(shù)與全部讀數(shù)的均數(shù)之差,應小于10%。
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