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如何通過BLS電融合儀以及配件聚集創(chuàng)建胚胎 |
注射器內(nèi)吸入培養(yǎng)基，在35mm組織培養(yǎng)板上微滴（大致直徑3mm）點樣成若干行（列）。向培養(yǎng)板內(nèi)小心注入石蠟油使其覆蓋整板，注意不要使石蠟油直接傾倒在微滴上。石蠟油很容易越過這些微滴。石蠟油的量要能*覆蓋這些微滴。 使用配件按照說明操作,制作凹陷。  37度, 5% CO2條件下孵育培養(yǎng)板幾個小時，目的是讓培養(yǎng)基在液滴內(nèi)達到平衡。這一步可以在形成凹陷的步驟之前進行。 實驗前準備好待聚集的細胞、組織或胚胎，不要將它們長時間暴露在室溫下或脫離zui適培養(yǎng)條件時間過長。通過在組織培養(yǎng)板蓋上加入幾滴M2培養(yǎng)基和Tyrode’s 酸溶液來去除卵透明帶。將組織培養(yǎng)板的培養(yǎng)區(qū)域表面如此處理后，胚胎將本能的黏附在表面——因此我們需要使用蓋。確認所有培養(yǎng)基溶液和酸液都接近室溫。將胚胎放置在一滴M2培養(yǎng)基上。取盡可能少的內(nèi)含10-20個胚胎的培養(yǎng)基，并移到一滴酸液上。重復這個步驟并將胚胎移到新的一滴酸液上。讓胚胎在吸頭內(nèi)保持上下移動，觀察卵透明帶是如何溶解的。迅速將胚胎移入M2培養(yǎng)基。用幾滴培養(yǎng)基溶液洗滌并移入剛才制成的凹陷中。 |
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