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血清標(biāo)本越新鮮越好:
1、制備血漿標(biāo)本需借助于抗凝劑,而血清標(biāo)本只需待血清天然凝聚、縮短后即可取得。
2、如有細(xì)菌污染,菌體中或許富含內(nèi)源性HRP,也會發(fā)生假陽性反應(yīng)。
3、如在冰箱中保存過久,其間可發(fā)生聚合,在間接法ELISA中可使本底加深。
4、血清標(biāo)本可按慣例方法搜集,應(yīng)留心避免溶血,紅細(xì)胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì),以HRP為符號的ELISA測定中,溶血標(biāo)本或許會添加非特異性顯色。
5、在5天內(nèi)測定的血清標(biāo)本可放置于4℃,逾越一星期測定的需低溫冰存。
6、凍住血清融解后,蛋白質(zhì)有些濃縮,分布不均,應(yīng)充分混勻宜輕緩,避免氣泡,可上下顛倒混和,不要在混勻器上激烈振蕩。
可以說在ELISA試劑盒操作中,洗滌是主要的關(guān)鍵技術(shù),因為聚苯乙烯等塑料對蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的,為達到分離游離的和結(jié)合的酶標(biāo)記物的目的,清除殘留在板孔中游離的物質(zhì),以及非特異性地吸附的干擾物質(zhì),在洗滌時又應(yīng)把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來,所以在洗板時會有一定誤差,人為因素很大,洗的不*或串了孔,對實驗結(jié)果將產(chǎn)生很大的影響,所以一定要小心。
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