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一次移液操作一般有哪些步驟

來源:上海沃元科技有限公司   2018年10月30日 10:26  
步:裝吸頭。移液器套柄用力下壓并小幅度旋轉(zhuǎn)即可
 
第二步:量程設(shè)定
1、移液器量程的設(shè)定原則:由大到?。?/div>
1)由大量程向小量程調(diào)節(jié)時:如從600μl調(diào)節(jié)至400μl,直接調(diào)節(jié);
2)由小量程向大量程調(diào)節(jié)時:先朝所需量程方向連貫旋轉(zhuǎn),旋轉(zhuǎn)到達(dá)超過所需量程1/3圈處,回調(diào)到所需量程處。如從20μl調(diào)節(jié)至50μl,先調(diào)節(jié)至60μl,再回旋至50μl。
   注:這是因為由小量程向大量程調(diào)節(jié)時,彈簧的彈性形變在短時間內(nèi)無法*回復(fù),需有一個恢復(fù)階段,可以想象一下剛從沙發(fā)上起身時,沙發(fā)墊恢復(fù)原狀也是需要一定時間的。
*正確的量程設(shè)定可以提高0.5%的移液準(zhǔn)確性!
 
2、量程范圍的選擇
選擇量程時,需要注意,一般在 10%-100% 量程范圍內(nèi)可以操作,但在 10% 量程操作需要較高的操作技巧。因此建議的佳量程是35%-100% 量程范圍。在此量程范圍,對操作技巧依賴更少,并保證移液的準(zhǔn)確性和精度。從表中可以看出,當(dāng)選擇的量程范圍越小,移液的準(zhǔn)確性和重復(fù)性就會越差。
*選擇合適的吸頭量程,可提高1%移液準(zhǔn)確性!
 
第三步:潤洗吸頭
用同一樣品對吸頭進(jìn)行潤洗。先吸取樣品,然后排回樣品池或廢液槽。充分吸液排液2-3次。
潤洗的作用:
1.在吸頭內(nèi)形成同質(zhì)膜,降低吸頭對樣品的吸附;
2.有助于提高吸頭多次相同移液操作的一致性。
注意:對于高溫/低溫樣品,由于熱脹冷縮帶來更大的誤差,不建議潤洗。
*潤洗吸頭可提高0.5%的移液準(zhǔn)確性!
 
第四步:吸液
此步影響移液準(zhǔn)確性的因素主要有以下4點:
1、吸頭浸入角度:建議盡量保持垂直,傾斜角度不大于15°。
*正確的移液角度,可提高2.5%移液準(zhǔn)確性!
2、吸頭的浸入深度:10μl以下的吸頭,浸入深度為1-2mm;10-200μl的吸頭,浸入深度為2-3mm;200-2000μl的吸頭,浸入深度為3-6mm;2000μl以上的吸頭,浸入深度為6-10mm。
*以正確吸頭浸入深度進(jìn)行吸液操作可提高1%的移液準(zhǔn)確性(微量程移液器可達(dá)5%)!
3、吸頭浸入時間:吸液后保持吸頭浸入液面少1秒,然后將吸頭平緩移開液面。對吸取大容量樣品或者高粘度樣品尤為重要。
4、吸液速度:吸液通常采用一檔吸液、二擋排液,在吸液時保持平順,緩慢松開活塞,控制好吸液速度。過快的吸液速度,會導(dǎo)致形成氣柱,使移液不準(zhǔn)確;樣品液進(jìn)入套柄,對活塞和密封圈造成損傷;帶入氣霧,造成樣品交叉污染。
*不正確的吸液速度會導(dǎo)致至少5%的準(zhǔn)確性下降!
 
第五步:排液和吹液
先將排液按鈕按至檔(排液檔),略作停頓以后,再按至第二檔(吹液檔)。
常規(guī)排液操作:
1.沿內(nèi)壁排液(常規(guī))
2.直接排入液面下:直接排入液面排液時要保持活塞下壓再離開液面,否則容易導(dǎo)致倒吸!
3.在液面上方排液
*正確的排液技術(shù)提高1%的移液準(zhǔn)確性!

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