土壤多酚氧化酶(Solid-Polyphenol oxidase,S-PPO)試劑盒說明書
分光光度法 50 管/48 樣
正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義:
S-PPO 主要來源于土壤微生物、植物根系分泌物及動植物殘體分解釋放,催化土壤中芳香族
化合物氧化成醌,醌與土壤中蛋白質(zhì)、氨基酸、糖類、礦物等物質(zhì)反應(yīng)生成有機質(zhì)和色素,
完成土壤芳香族化合物循環(huán),用于土壤環(huán)境修復(fù)。
測定原理:
S-PPO 能夠催化鄰苯三酚產(chǎn)生有色物質(zhì),后者在430nm 有特征光吸收。
自備用品:
可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、(不
允許快遞)、蒸餾水。
試劑組成和配制
試劑一:粉劑×2 瓶,4℃保存;臨用前取一瓶加入15mL 蒸餾水,用不完的試劑4℃保存一周;
試劑二:液體12mL×1 瓶,4℃保存;
試劑三:50mL×2 瓶,4℃保存;(自備)
樣品處理
新鮮土樣自然風干或37 度烘箱風干,過30~50 目篩。
測定步驟
試劑名稱 測定管
風干土樣(g) 0.05
試劑一(μL) 500
振蕩混勻,30℃恒溫培養(yǎng)1 h
試劑二(μL) 200
試劑三(μL) 1750
振蕩數(shù)次,室溫靜置30min,用蒸餾水調(diào)零,取1mL 上層液于430nm 處測定吸光值A。
(注意:1、因粘度小,易掉液,吸取前需先將槍頭在上層液里潤洗 2~3 次,再轉(zhuǎn)移測
定;2、易揮發(fā),轉(zhuǎn)移到 96 孔板后立即測定,一個一個測定)。
S-PPO 活力計算
標準條件下測定的回歸方程為y = 8.97x -0.003;x 為標準品濃度(mg/mL),y 為吸光值A。
單位的定義:每天每g 土樣中產(chǎn)生1mg 紫色沒食子素定義為一個酶活力單位。
S-PPO 活力(mg/d /g 土樣)=(A+0.003) ÷8.97×V 反總÷W÷T=131×(A+0.003)
T:反應(yīng)時間,1h=1/24d; V 反總:反應(yīng)體系總體積2.45mL;W:樣本質(zhì)量,0.05g。
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