土壤多酚氧化酶（Solid-Polyphenol oxidase，S-PPO）試劑盒說明書

分光光度法 50 管/48 樣

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義：

S-PPO 主要來源于土壤微生物、植物根系分泌物及動植物殘體分解釋放，催化土壤中芳香族

化合物氧化成醌，醌與土壤中蛋白質(zhì)、氨基酸、糖類、礦物等物質(zhì)反應生成有機質(zhì)和色素，

完成土壤芳香族化合物循環(huán)，用于土壤環(huán)境修復。

測定原理：

S-PPO 能夠催化鄰苯三酚產(chǎn)生有色物質(zhì)，后者在430nm 有特征光吸收。

自備用品：

可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、（不

允許快遞）、蒸餾水。

試劑組成和配制

試劑一：粉劑×2 瓶，4℃保存；臨用前取一瓶加入15mL 蒸餾水，用不完的試劑4℃保存一周；

試劑二：液體12mL×1 瓶，4℃保存；

試劑三：50mL×2 瓶，4℃保存；（自備）

樣品處理

新鮮土樣自然風干或37 度烘箱風干，過30~50 目篩。

測定步驟

試劑名稱 測定管

風干土樣（g） 0.05

試劑一（μL） 500

振蕩混勻，30℃恒溫培養(yǎng)1 h

試劑二（μL） 200

試劑三（μL） 1750

振蕩數(shù)次，室溫靜置30min，用蒸餾水調(diào)零，取1mL 上層液于430nm 處測定吸光值A。

（注意：1、因粘度小，易掉液，吸取前需先將槍頭在上層液里潤洗 2~3 次，再轉(zhuǎn)移測

定；2、易揮發(fā)，轉(zhuǎn)移到 96 孔板后立即測定，一個一個測定）。

S-PPO 活力計算

標準條件下測定的回歸方程為y = 8.97x -0.003；x 為標準品濃度（mg/mL），y 為吸光值A。

單位的定義：每天每g 土樣中產(chǎn)生1mg 紫色沒食子素定義為一個酶活力單位。

S-PPO 活力（mg/d /g 土樣）＝(A+0.003) ÷8.97×V 反總÷W÷T=131×(A+0.003)

T：反應時間，1h=1/24d； V 反總：反應體系總體積2.45mL；W：樣本質(zhì)量，0.05g。