甲苯胺藍(lán)是常用的人工合成染料的一種屬于醌亞胺染料類,是堿性染料,甲苯胺藍(lán)中的陽(yáng)離子有染色作用,組織細(xì)胞的酸性物質(zhì)與其中的陽(yáng)離子相結(jié)合而被染色,可染細(xì)胞核使之呈藍(lán)色;肥大細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)含有肝素和組織胺等異色性物質(zhì)遇到甲苯胺藍(lán)可呈異染性紫紅色,可用于尖銳濕疣的初篩及肥大細(xì)胞的檢測(cè)。不推薦用于軟骨、胃粘膜等難染組織的染色。
肥大細(xì)胞的染色:
(1)組織脫蠟水。
(2)蒸餾水浸洗2-3次。
(3)甲苯胺藍(lán)染液染20-30min。
(4)稍水洗,洗去多余染色液。
(5)95%酒精分色,在鏡下控制分色效果。
(6) 用100%酒精脫水。
(7)二甲苯透明,中性樹膠封片。
肥大細(xì)胞染色結(jié)果:肥大細(xì)胞顆粒呈紅紫色,胞核呈藍(lán)色。
細(xì)胞涂片染色 :
(1)細(xì)胞涂片后,立即放入95%的乙醇中固定,取出放在紙巾上。
(2)滴加1~2滴稀釋后的甲苯胺藍(lán)染色液進(jìn)行滴染,加蓋玻片讓染料滲透到細(xì)胞中。
(3)后將玻片豎起,稍加壓力,使多余染料被紙巾吸去。
(4)無(wú)需干燥,直接鏡檢。
細(xì)胞涂片染色結(jié)果:細(xì)胞核、淋巴細(xì)胞呈深藍(lán)色;核仁呈紫紅色;紅細(xì)胞呈橘紅;細(xì)胞質(zhì)、單核細(xì)胞呈淡藍(lán)色。
原位雜交染色 :
(1)用蒸餾水或去離子水稀釋到相應(yīng)的濃度,憑經(jīng)驗(yàn)一般稀釋比例大于1:10。
(2) 玻片在稀釋好的染色液中短暫浸泡。
(3) 在蒸餾水或去離子水浸泡數(shù)次。
(4) 按需求進(jìn)行壓片固定。
神經(jīng)元細(xì)胞的染色:
(1)將載有細(xì)胞的玻片取出放入4%多聚甲醛中固定1h左右;
(2)到時(shí)間后取出用PBS沖洗1~2次即可;
(3)然后加入提前預(yù)熱的1%甲苯胺藍(lán)溶液,在50度左右的氣浴或水浴中染色20~30min;
(4)用梯度酒精已次脫水,分別為75%、90%、100%,也可自定梯度;
(5)在鏡下控制分色效果,這一步不太好掌握;
神經(jīng)元細(xì)胞染色結(jié)果:可見(jiàn)尼氏小體深藍(lán)色顆粒,細(xì)胞核呈淡藍(lán)色,背景基本無(wú)色。
上海吉生化科技有限公司自產(chǎn)產(chǎn)品1%甲苯胺藍(lán)染色液,產(chǎn)品編號(hào)號(hào)為T82960,主要用于生化實(shí)驗(yàn)中肥大細(xì)胞的檢測(cè)。
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