核酸的定量是分光光度計(jì)使用頻率高的功能??梢远咳苡诰彌_液的寡核苷酸,單鏈、雙鏈DNA,以及RNA。核酸的高吸收峰的吸收波長260 nm。每種核酸的分子構(gòu)成不一,因此其換算系數(shù)不同。定量不同類型的核酸,事先要選擇對應(yīng)的系數(shù)。如:1OD 的吸光值分別相當(dāng)于50μg/ml的dsDNA,37μg/ml的ssDNA,40μg/ml的RNA,30μg/ml的Olig。測試后的吸光值經(jīng)過上述系數(shù)的換算,從而得出相應(yīng)的樣品濃度。測試前,選擇正確的程序,輸入原液和稀釋液的體積,爾后測試空白液和樣品液。然而,實(shí)驗(yàn)并非一帆風(fēng)順。讀數(shù)不穩(wěn)定可能是實(shí)驗(yàn)者頭痛的問題。靈敏度越高的儀器,表現(xiàn)出的吸光值漂移越大。
分光光度計(jì)根據(jù)檢測透射光形式的不同,可分為目測式分光光度計(jì)、照相式分光光度計(jì)、光電式分光光度計(jì)和差熱式分光光度計(jì)等幾種類型;根據(jù)所能測定的波長范圍的不同,它又可以分成紫外分光光度計(jì)、可見光分光光度計(jì)和紅外分光光度計(jì)。
不論哪種分光光度計(jì),部是由光源、單色器、吸收池(比色槽)、接受器(光電池或光電管)以及電子線路測量(記錄)儀表等幾部分組成。按照設(shè)計(jì)的波長范圍的不同,光源有鎢絲燈、氫孤燈、電孤燈、電火花、奈恩斯特輝光燈以及碳化硅熱棒等,單色器則有玻璃、石英、熒石、巖鹽和其它堿金屬鹵化物制成的棱鏡以及繞射光柵和反射光柵等I接受器簡單的是人的眼睹,還有光電池、光電管、熱電偶和照相干板等,測量儀器有檢流計(jì)、電子電位計(jì)和測激光度計(jì)等。
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