如果想簡單、快速地分離細(xì)胞,大家反應(yīng)肯定是密度梯度離心介質(zhì);如果您想分離人淋巴細(xì)胞,那當(dāng)然少不了Ficoll啦。
Ficoll是蔗糖的多聚體,呈中性,平均分子量為400,000,當(dāng)密度為1.2g/ml仍未超出正常生理性滲透壓,也不穿過生物膜。紅細(xì)胞、粒細(xì)胞比重大,離心后沉于管底;淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞的比重小于或等于分層液比重,離心后漂浮于分層液的液面上,也可有少部分細(xì)胞懸浮在分層液中。吸取分層液液面的細(xì)胞,就可從外周血中分離到單個核細(xì)胞。
PBMC(Peripheral blood mononuclear cell),外周血單個核細(xì)胞,其細(xì)胞類型為血液中具有單個核的細(xì)胞,主要包括淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞等,其中淋巴細(xì)胞占很大一部分。
愛必信淋巴細(xì)胞分離介質(zhì)Lymphocyte Separation Medium(human, Ficoll-Paque)是一種無菌的、即用型的Ficoll-泛影酸鈉密度梯度介質(zhì),能夠簡單快速的從少量或大量的人外周血、骨髓和臍帶血中高產(chǎn)和高純度的提純淋巴細(xì)胞。本品內(nèi)毒素水平非常低,小于0.12EU/mL,分離所得的細(xì)胞中95%左右為單個核細(xì)胞,細(xì)胞存活率大于90%,回收率為60%左右。
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Ficoll-Paque分離人外周血PBMC的示意圖:
操作protocol:
01\ 樣本準(zhǔn)備
將2mL外周血轉(zhuǎn)移到15mL離心管中;
用等量的2mLPBS稀釋外周血,注意吹打或顛倒混勻(如需無菌操作請在超凈臺內(nèi)完成);
02\ 分離步驟
在離心管中加入3mL 提前混勻的Ficoll-Paque(無菌操作請用注射器);
將稀釋好的血液樣本緩慢加在Ficoll細(xì)胞分離液上,保證Ficoll與樣本之間界面清晰(注意不要吹打或顛倒混勻);
離心300g,20℃,20min(注意要設(shè)置緩降,不能驟停);
輕輕移除上層分離液(血漿);
愛必信abs930 Ficoll-Paque分離淋巴細(xì)胞實驗圖
03\ 洗滌淋巴細(xì)胞
吸取“白膜層”PBMC,將其轉(zhuǎn)移到新的15mL離心管中;
加3-5倍PBS充分混勻;
離心300g,20℃,10min(*棄去上清,沉淀即PBMC細(xì)胞);
用適量PBS重懸、進行細(xì)胞計數(shù)(當(dāng)細(xì)胞量>10E7時,要擴大相應(yīng)試劑用量);
離心300g,10min(*棄去上清);
備注:
(1)實驗操作前,先將Ficoll-Paque和血液樣本在室溫放置一段時間,保持溫度為18℃和20℃;
(2)分離PBMC步離心的時候,一定不能設(shè)置制動或設(shè)置低水平的制動,否則將分層混亂。
產(chǎn)品訂購信息:
貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
abs930 | Lymphocyte Separation Medium(human, Ficoll-Paque ) | 50ml/100ml |
abs9102 | Percoll | 100ml |
愛必信特色產(chǎn)品線(全部現(xiàn)貨):
二抗、標(biāo)簽抗體、對照抗體;WB相關(guān):ECL發(fā)光液、預(yù)染marker、預(yù)制膠;IHC相關(guān):二抗試劑盒、組化筆;IP/CoIP試劑盒;細(xì)胞因子、信號通路調(diào)節(jié)劑;血清、BSA、蛋白酶K、CTB、TTX、CEE;凋亡試劑盒、呼吸爆發(fā)試劑盒;動植物提取物,定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白)...
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