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流式細(xì)胞術(shù)的發(fā)展意義重大
流式細(xì)胞術(shù) (Flow Cytometry)是70年代發(fā)展起來(lái)的一種利用流式細(xì)胞儀對(duì)細(xì)胞等生物粒子的理化及生物學(xué)特性(細(xì)胞大小、DNA/RNA含量、細(xì)胞表面抗原表達(dá)等)進(jìn)行定量、快速、客觀多參數(shù)相關(guān)檢測(cè)分析的新技術(shù)。它借鑒了熒光顯微鏡技術(shù)與血球計(jì)數(shù)原理,同時(shí)利用熒光染料,激光技術(shù),單抗技術(shù)以及計(jì)算機(jī)技術(shù)的發(fā)展,大大提高了檢測(cè)速度與統(tǒng)計(jì)性,而且從同一個(gè)細(xì)胞中可以同時(shí)測(cè)得多種參數(shù),為生物醫(yī)學(xué)與臨床檢驗(yàn)學(xué)發(fā)展提供了一個(gè)全新的視角和強(qiáng)有力的手段。
FCM在生命科學(xué)中的應(yīng)用,標(biāo)志著細(xì)胞生物學(xué)、腫瘤學(xué)、免疫學(xué)等進(jìn)入了細(xì)胞和分子水平的研究。為從微觀認(rèn)識(shí)細(xì)胞及橫向比較特征提供了精密、準(zhǔn)確的方法和儀器。
1、流式細(xì)胞儀系統(tǒng)流程：
標(biāo)本→激光系統(tǒng)→流動(dòng)系統(tǒng)→信號(hào)處理系統(tǒng)→放大系統(tǒng)→計(jì)算機(jī)系統(tǒng)→結(jié)果打印
2、基本原理：
待測(cè)標(biāo)本制備成單細(xì)胞懸液通過(guò)熒光染色后進(jìn)入充滿鞘液的流動(dòng)室，鞘液壓力與樣品流壓力是不同的，當(dāng)二者的壓力差異達(dá)到一定程度時(shí)，鞘液裹挾著樣品流中細(xì)胞排成單列逐個(gè)經(jīng)過(guò)激光聚焦區(qū)。如果我們將細(xì)胞中感興趣的部分特異性的標(biāo)上熒光染料，那麼這些染料將在細(xì)胞通過(guò)激光檢測(cè)區(qū)時(shí)受激光發(fā)出特定波長(zhǎng)的熒光,通過(guò)一定波長(zhǎng)選擇通透性的濾色片,我們可將不同波長(zhǎng)的散射光、熒光信號(hào)區(qū)分開(kāi)來(lái)，并送到不同的光電倍增管中，經(jīng)過(guò)一系列的信號(hào)轉(zhuǎn)換、放大，數(shù)字化處理，我們就可以在計(jì)算機(jī)直觀的統(tǒng)計(jì)染上各種熒光染料的細(xì)胞各自的百分率。選擇不同的單克隆抗體及熒光染料，我們可以利用FC同時(shí)測(cè)定一個(gè)細(xì)胞上的多種不同特征;如果對(duì)具有某種特征的細(xì)胞有興趣，我們還可以利用流式的分選功能將其分選出來(lái)，以便進(jìn)一步培養(yǎng)、研究。
3、意義：
FCM與單克隆抗體結(jié)合，可對(duì)細(xì)胞表面和細(xì)胞內(nèi)抗原、癌基因蛋白及膜受體進(jìn)行定量檢測(cè)，成為臨床檢驗(yàn)與研究的重要指標(biāo)。流式免疫熒光技術(shù)不僅能將表達(dá)位點(diǎn)的細(xì)胞群區(qū)分開(kāi)來(lái)，而且還能進(jìn)一步區(qū)分各細(xì)胞亞群。對(duì)免疫功能障礙、造血系統(tǒng)疾病及惡性腫瘤的研究、診斷、治療和預(yù)后評(píng)估都能起到重要作用。
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