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ELISA試劑盒洗滌很重要及抗體濃度須優(yōu)化

來源:上海研生實(shí)業(yè)有限公司   2019年03月27日 15:12  

       ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)的原理似乎很簡(jiǎn)單,不外乎固定抗原,添加一抗、二抗和底物,間中夾雜著

洗滌和封閉。然而,即使是平淡無奇的洗滌和封閉,如果做得不太好,也有可能毀了整個(gè)實(shí)驗(yàn)

。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí),我們是否能獲得有意義的信息,這在很大程度上取決于結(jié)果的信噪比。背景

噪音會(huì)影響您對(duì)結(jié)果的判斷。如何降低ELISA的背景,下面有一些tips。

洗滌很重要

洗滌步驟看似很無聊,其實(shí)很重要,因?yàn)槿绻唇Y(jié)合的材料(如非特異結(jié)合的抗體或檢測(cè)試劑)

殘留在微孔板中,那么它會(huì)增加背景噪音。如有必要,可增加洗滌液中的鹽濃度,這會(huì)阻止非

特異結(jié)合反應(yīng)。如果背景過高,而您懷疑洗滌不夠時(shí),可以嘗試增加洗滌次數(shù)。

抗體濃度須優(yōu)化

我們通常會(huì)follow師兄師姐留下來的操作步驟,但是如果試劑稍有不同,則可能需要優(yōu)化抗體

的量。記住,非特異的抗體結(jié)合會(huì)增加背景。為了防止這一點(diǎn),切勿使用過多的一抗或二抗。

檢測(cè)試劑要適量

另一點(diǎn)也很顯而易見:切勿使用過多的檢測(cè)試劑。如果濃度過高,或者未正確稀釋,則會(huì)導(dǎo)致

高背景。也不要顯色過度,如有必要,優(yōu)化一下何時(shí)應(yīng)加入終止液。

    如果您的ELISA不幸地遇到了高背景,那么也無需太擔(dān)心,依次查看ELISA系統(tǒng)中的組分,

并排除可能存在的問題。悉心優(yōu)化,相信很快就會(huì)有漂亮的結(jié)果。

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