国产精品视频一区二区三区四,亚洲av美洲av综合av,99国内精品久久久久久久,欧美电影一区二区三区电影

產(chǎn)品推薦:氣相|液相|光譜|質(zhì)譜|電化學(xué)|元素分析|水分測(cè)定儀|樣品前處理|試驗(yàn)機(jī)|培養(yǎng)箱


化工儀器網(wǎng)>技術(shù)中心>技術(shù)參數(shù)>正文

歡迎聯(lián)系我

有什么可以幫您? 在線咨詢

Taq酶在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)細(xì)節(jié)

來(lái)源:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司   2019年03月29日 09:27  

1976年Chien分離出熱穩(wěn)定聚合酶,1986年Erlich分離并純化了適于聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的Tq熱穩(wěn)定性聚合酶,為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)成為實(shí)用技術(shù)奠定了基礎(chǔ),現(xiàn)已用基因重組。日前可用于聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的聚合酶有多種:有從水生棲熱菌中提取的Taq酶、從嗜熱棲熱苗中獲得的Taq酶、從Litoralis棲熱球菌中分離的VENT酶、及從酸熱浴硫化裂片苗中分離的Sac酶,而以Taq酶用得廣泛。Taq DNA聚合酶分子量為94kD,75℃時(shí)酶比活性為150bs/酶分子,反應(yīng)溫度過高或過低均影響其延伸率,Taq蕾有很高的耐熱穩(wěn)定性。豬elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)表明,在92.5℃、95℃、97.5℃時(shí),其半衰期分別為40min、30min和5min。

純化的Taq酶在體外無(wú)3'-5'外切酶活性,因而無(wú)校正閱讀功能,在擴(kuò)增過程可引起錯(cuò)配。錯(cuò)配堿基的數(shù)量受溫度、Mg2+濃度和循環(huán)次數(shù)的影響。通常,30次循環(huán)Taq酶的錯(cuò)配率約為0.25%,高于Klenow酶的錯(cuò)配率。Taq酶在每一次循環(huán)中產(chǎn)生的移碼突變率為1/30000,堿基替換率為1/8000。應(yīng)用低濃度的dNTP(各20μmol/L)、1.5mmol/L的Mg2+濃度、高于55℃的復(fù)性溫度,可提高Taq酶的忠實(shí)性,此時(shí)的平均錯(cuò)配率僅為5x10^-6次/(核苷酸*循環(huán))。

Taq酶具有類似于末端轉(zhuǎn)移酶的TdT的活性,可在新生成的雙鏈產(chǎn)物的3'端加上—個(gè)堿基,尤其是dATP容易加上。因此,欲將聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)產(chǎn)物克隆到載體上,可以用兩種處理辦法:一是構(gòu)建dT-載體;二是用Klenow酶將3'端的A去掉,即在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)反應(yīng)后,先在99℃加熱10min滅活Taq酶,調(diào)整Mg2+濃度至5-10mmol/L,加入1-2U Klenow片段,室溫下作用15-20min,3'端的A即被切去,

以往用Taq酶進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增,一般只能擴(kuò)增小于400bp的DNA片段,經(jīng)過對(duì)酶的結(jié)構(gòu)與功能的改造,以及聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)方法學(xué)的改進(jìn),現(xiàn)已能擴(kuò)增20kb以上的DNA分于。

Taq酶在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)反應(yīng)中加入的量也很重要,太少當(dāng)然不好,太多一方面浪費(fèi),同時(shí)也導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增,通常每lOOμl反應(yīng)液中含1-2.5U Taq酶為好。在0.5-5U范圍內(nèi)確定佳酶濃度。另一個(gè)問題是,雖然Taq酶是熱穩(wěn)定性較好的工具酶,也應(yīng)注意在-20℃貯存。

免責(zé)聲明

  • 凡本網(wǎng)注明“來(lái)源:化工儀器網(wǎng)”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品,未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的,應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用,并注明“來(lái)源:化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者,本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
  • 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來(lái)源(非化工儀器網(wǎng))的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對(duì)其真實(shí)性負(fù)責(zé),不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí),必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來(lái)源,并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
  • 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題,請(qǐng)?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。
企業(yè)未開通此功能
詳詢客服 : 0571-87858618
肇州县| 漳浦县| 专栏| 彭阳县| 苏尼特右旗| 嘉峪关市| 海晏县| 铜川市| 左贡县| 苍山县| 安庆市| 依兰县| 马尔康县| 炎陵县| 翼城县| 衡水市| 潮州市| 手机| 临清市| 聂拉木县| 平原县| 来宾市| 新乐市| 吉林市| 泰兴市| 张家港市| 吉水县| 垦利县| 长沙市| 丽水市| 石楼县| 南投市| 汶川县| 宁国市| 肥乡县| 马龙县| 广丰县| 庆元县| 迁安市| 增城市| 东丽区|