黃曲霉毒素主要存在于谷物、堅(jiān)果、花生、棉籽粉、玉米、干辣椒粉等食品中以及一些與人類(lèi)血液，動(dòng)物飼料相關(guān)的產(chǎn)品中。霉菌的生長(zhǎng)并不一定表明黃曲霉毒素的存在，因?yàn)辄S曲霉毒素只有在濕度、溫度適合及通風(fēng)良好才會(huì)生成。黃曲霉毒素B類(lèi)具有藍(lán)色熒光，G類(lèi)具有綠色熒光。除了蔬菜中常見(jiàn)的(B1,B2,G1,G2)，還有存在喂食了有毒飼料的奶牛的牛奶中的黃曲霉毒素M，其中毒性高的M的代謝物為4－羥基化的產(chǎn)物Bs.黃曲霉毒素M1是黃曲霉毒素B1的羥基化代謝產(chǎn)物，也是一種強(qiáng)致癌物質(zhì)。其危害巨大，人類(lèi)日常消費(fèi)食品中如牛乳及其制品是易受到黃曲霉毒素M1污染的食品之一。黃曲霉毒素的危害性在于對(duì)人及動(dòng)物肝臟組織有破壞作用，嚴(yán)重時(shí)，可導(dǎo)致肝癌甚至死亡。毒性是As₂O₃的100倍其實(shí)主要是指黃曲霉毒素比As₂O₃毒。

目前來(lái)講，Aflatoxin M1的檢測(cè)方法有液相色譜法(HPLC)，酶聯(lián)免疫檢測(cè)法等。液相色譜法可以的檢測(cè)奶制品中黃曲霉毒素的微小含量。而使用黃曲霉毒素M1 ELISA試劑盒則能夠快速而準(zhǔn)確的分析樣品中黃曲霉毒素M1殘留。

作為國(guó)內(nèi)專(zhuān)業(yè)從事霉菌毒素檢測(cè)技術(shù)與產(chǎn)品服務(wù)的主要供應(yīng)商， 2010年泰樂(lè)祺科技投巨資成立了"檢測(cè)應(yīng)用實(shí)驗(yàn)室"，重點(diǎn)關(guān)注食品安全事件尤其是涉及霉菌毒素安全等檢測(cè)技術(shù)問(wèn)題，以期望快速提出解決方案。近期應(yīng)針對(duì)奶中出現(xiàn)的黃曲霉毒素M1超標(biāo)問(wèn)題，泰樂(lè)祺科技提供了兩種檢測(cè)方案，可以幫助企業(yè)輕松應(yīng)對(duì)奶中黃曲霉毒素M1的*檢測(cè)。

液相色譜法：

根據(jù)國(guó)標(biāo)《GB 5413.37—2010》食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)乳和乳制品中黃曲霉毒素M1 的測(cè)定

　實(shí)驗(yàn)用前處理：

實(shí)驗(yàn)儀器和好耗材包括：

恒溫水浴鍋　溶劑過(guò)濾器(帶真空泵)1000ml  高速勻質(zhì)器 黃曲霉毒素免疫M(jìn)1親和柱玻璃纖維濾紙 玻璃注射器 無(wú)熒光特性玻璃試管 空氣壓力泵 超聲波清洗機(jī)  定量濾紙 量筒 樣品瓶 容量瓶 移液器或移液管

　　實(shí)驗(yàn)用試劑：色譜乙腈色譜甲醇 氫氧化鈉 石油醚 超純水或去離子水等等

HPLC條件：

樣品取樣：真菌毒素分析的大誤差來(lái)源是樣品的收集和取樣過(guò)程，所以必需保證樣品收集和取樣具有代表性。

樣品前處理：分不同樣品

牛奶  水浴加熱至40度，離心用上清液過(guò)柱凈化；

乳粉和粉狀嬰幼兒配方食品：稱(chēng)取適量奶粉樣品，用于蒸餾水中，混合均勻使其充分溶解，離心離心用上清液過(guò)柱凈化；

發(fā)酵乳(包括固體狀、半固體狀和帶果肉型)：稱(chēng)取適量奶粉樣品，用于蒸餾水中，調(diào)節(jié)PH值至微堿性，高速均質(zhì)器勻漿，水浴加熱后離心，取上清液混合均勻使其充分溶解，離心離心用上清液過(guò)柱凈化；

干酪：稱(chēng)取適量切細(xì)或粉碎，過(guò)篩用加純水溶解，高速均質(zhì)器勻漿，超聲提取后收集上清液，然后用石油醚進(jìn)行兩次萃取，然后用適宜的有機(jī)溶液萃取，取若干上清液過(guò)柱凈化

奶粉樣品，用于蒸餾水溶解中，調(diào)節(jié)PH值至微堿性，水浴加熱后離心，取上清液混合均勻使其充分溶解，離心離心用上清液過(guò)柱凈化；

奶油：稱(chēng)取適量加甲醇水溶解，震蕩后分頁(yè)漏斗取下層溶液，蒸干后溶于水用于過(guò)柱凈化。

免疫柱凈化步驟：*符合GB/T 18980-2003

┅┅取出免疫親和層析柱, 恢復(fù)至室溫，將上方塞子取出斜剪斷，再插回親和柱上。

┅┅將免疫親和柱連接于玻璃注射器下。準(zhǔn)確移取清澈液注入玻璃注射器；

┅┅將空氣壓力泵與玻璃注射器連接，調(diào)節(jié)壓力使溶液以約2-3mL/min流速緩慢通過(guò)免疫親和柱，直至2~3mL空氣通過(guò)柱體；

┅┅更換玻璃注射器與親和柱連接，在注射器中加入10ml水，調(diào)節(jié)壓力使水以約6mL/min流速清洗親和柱。

┅┅準(zhǔn)確加入4mL色譜級(jí)乙腈洗脫，流速為1 mL/min ~2mL/min，收集全部洗脫液于玻璃試管中，供檢測(cè)。

注：收集管中的洗脫液即為純化后的樣品，可直接用ELISA,熒光和液相等方法檢測(cè)。

HPLC 檢測(cè)需要儀器與耗材

酶聯(lián)免疫檢測(cè)法：符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

酶聯(lián)免疫檢測(cè)法采用競(jìng)爭(zhēng)ELISA，在微孔板上預(yù)包被黃曲霉毒素B1抗原，加入樣本（或黃曲霉毒素M1標(biāo)準(zhǔn)品溶液）及辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的黃曲霉毒素M1抗體。樣本或標(biāo)準(zhǔn)品溶液中的黃曲霉毒素M1與預(yù)包被在板孔上的黃曲霉毒素M1抗原競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的黃曲霉毒素M1抗體。未結(jié)合的酶標(biāo)抗體在洗滌時(shí)被除去。再加入TMB顯色液，讀取吸光值。樣本的吸光值與其所含殘留物黃曲霉毒素M1抗原的含量成負(fù)相關(guān)。對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，即可得出相應(yīng)殘留物黃曲霉毒素M1的含量。

樣品處理

牛奶 直接離心取上清液用于檢測(cè)

奶粉及其他固狀奶制品：需要溶解于去離子水中，離心取上清液用于檢測(cè)

試劑盒檢測(cè)時(shí)間：30分鐘＋30分鐘

交叉反應(yīng)率：

ELISA 方法檢測(cè)需要：

　　分析人員要求：

化學(xué)分析儀器及其相關(guān)專(zhuān)業(yè)或有液相色譜儀操作經(jīng)驗(yàn)的人員。

注：作為面向提供霉菌毒素檢測(cè)技術(shù)解決方案的主要服務(wù)商之一，PriboLab憑借強(qiáng)大的研發(fā)團(tuán)隊(duì)和霉菌毒素檢測(cè)技術(shù)的研究，為農(nóng)業(yè)生產(chǎn)、食品加工與糧食、飼料工業(yè)等行業(yè)提供專(zhuān)業(yè)的真菌毒素檢測(cè)技術(shù)產(chǎn)品與技術(shù)服務(wù)。北京泰樂(lè)祺作為 PriboLab在中國(guó)的合作伙伴，積極為國(guó)內(nèi)客戶(hù)提供的霉菌毒素檢測(cè)技術(shù)與產(chǎn)品服務(wù)，為國(guó)內(nèi)客戶(hù)提供適宜的霉菌毒素檢測(cè)方案，幫助國(guó)內(nèi)客戶(hù)建立的霉菌毒素項(xiàng)目檢測(cè)平臺(tái)。