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EVOQ™液質(zhì)聯(lián)用 三重四級桿質(zhì)譜儀-馬血漿中克侖特羅檢測的應(yīng)用

來源:上海斯邁歐分析儀器有限公司   2019年04月15日 19:09  

本文討論了EVOQ LC-TQ在反復(fù)進(jìn)樣馬血漿樣品條件下可 維持的高靈敏度。含有克侖特羅的馬血漿樣品,去除蛋白 后,未通過分流閥直接注射到系統(tǒng)中(稀釋并進(jìn)樣)。對四 條標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行了分析:開始時(shí)一條,每隔100個(gè)樣品做一 條。結(jié)果顯示,使用EVOQ LC-TQ測試,在連續(xù)兩天時(shí)間分 布在400個(gè)馬血漿樣品中的四條標(biāo)準(zhǔn)曲線,響應(yīng)因子的相 對標(biāo)準(zhǔn)偏差(%RSD)成功達(dá)到<10%的評判標(biāo)準(zhǔn),響應(yīng)因 子的%RSD<5%。

 

可維持的高靈敏度和高穩(wěn)定性是實(shí)驗(yàn)室定量分析成功與否 的決定性因素。本實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖菧y試布魯克EVOQ LC-TQ的離子源 設(shè)計(jì),對馬血漿樣品采取稀釋后直接進(jìn)樣的方式,沒有通 過在線的分流閥。每一個(gè)樣品進(jìn)樣,離子源都暴露在從柱 子上洗脫出的所有基質(zhì)中。因?yàn)樵陔妵婌F過程中,流動相在 加熱的氮?dú)廨o助下霧化蒸發(fā),鹽、脂質(zhì)、糖、蛋白質(zhì)和其他 污染物容易凝聚在離子源內(nèi),隨著時(shí)間的推移導(dǎo)致靈敏度 降低。如果仔細(xì)研究離子源內(nèi)氣體流體動力學(xué),設(shè)計(jì)應(yīng)避 免凝聚區(qū)域和冷卻點(diǎn),并消除氣體渦流。采用夾帶排空系 統(tǒng) (主動排空) 可以顯著提高離子源的穩(wěn)定性,同時(shí)保持高 靈敏度。通過簡單的有機(jī)溶劑沉淀除去蛋白后的馬血漿樣 品被用做基質(zhì),用于稀釋后進(jìn)樣實(shí)驗(yàn)。

 

實(shí)驗(yàn)條件

Sample Preparation 馬血漿樣品用冷的含酸乙腈沉淀(3:1,v/v),樣品離心 10 min,取上清液按體積比1:1用流動相A稀釋。 色譜 (Advance™ HPLC)

• 色譜柱: C18, 3 μ, 100x2.1 mm (ACE®, 編號:111-1002)

• 進(jìn)樣體積: 30 μL • 流速: 0.45 mL/min

• 流動相 A: 0.2% 甲酸水溶液

• 流動相 B: 0.2% 甲酸乙腈溶液

• 梯度: • 0.0min 10% B • 0.3min 10% B

• 2.5min 95% B • 2.8min 10% B • 4.5min 10% B 質(zhì)譜 (EVOQ Elite™)

• VIP-HESI 真空隔層加熱電噴霧離子源的加熱溫度: 300 °C

• 加熱氣體流量:68 unit • 霧化氣流量:90 unit

• 錐孔氣溫度:300 °C • 錐孔氣流量:10 unit

• 噴霧電壓:+3500 V • 克倫特羅和克倫特羅D9標(biāo)記物

• m/z 277.1>168 (CE:25v) • m/z 286.1>204 (CE:12v)

 

結(jié)果和討論

響應(yīng)因子是在整個(gè)校正范圍內(nèi),校與內(nèi)標(biāo)物的峰面積 比(校正/ IS)除以濃度。這是嚴(yán)格的靈敏度檢測方法,因?yàn)?它考慮到校正曲線上的每一個(gè)點(diǎn)。靈敏度的任何下降都將 表現(xiàn)為響應(yīng)因子較高的%RSD。離子源同時(shí)需要穩(wěn)定性和 持續(xù)高靈敏度,從實(shí)用角度講,這一數(shù)據(jù)的重要性超過一系 列高濃度進(jìn)樣的重復(fù)性,而后者在供應(yīng)商的市場營銷文獻(xiàn) 中經(jīng)常出現(xiàn)。 四條校正曲線的響應(yīng)因子的%RSD小于5%,很好的滿足生 物分析方法的驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)。圖1顯示了和第四校正曲線的 擬合情況,兩者差異微不足道,并在整個(gè)校正范圍內(nèi)表現(xiàn)出 高靈敏度。

主動排空系統(tǒng):

主動排空系統(tǒng)在離子源內(nèi)創(chuàng)造微弱的壓 力差,從而引導(dǎo)并消除霧化氣和污染物的 渦流。廣口排氣通道確保迅速清空霧化 氣體,保持前面離子取樣錐孔的潔凈。霧 化氣體被夾帶在排氣系統(tǒng)的氣流中,從 LC-MS系統(tǒng)中清除。

表1和2表明,在反復(fù)進(jìn)樣血漿樣品后,離子源可維持的高靈 敏度性能,這是一個(gè)常規(guī)生化實(shí)驗(yàn)室惡劣環(huán)境下的關(guān)鍵需 求。圖3顯示了所有四條校正曲線中,校正水平樣品的 色譜圖。

 

結(jié)論 :本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,EVOQ LC-TQ連續(xù)運(yùn)行超過48小時(shí)(周 末),并成功地分析了五個(gè)96孔板的樣品,其靈敏度損失微 不足道。主動排空設(shè)計(jì)使得EVOQ LC-TQ離子源盡管反復(fù) 暴露于基質(zhì)中,仍能保持高的靈敏度水平,確保在條件苛 刻的定量分析實(shí)驗(yàn)室仍能保持穩(wěn)定的狀態(tài)。

 

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