低分子肝素(low-molecular-weight heparin, LMWH) 是近年發(fā)展起來的新一代肝素類抗血栓藥物, 其抗血栓作用優(yōu)于肝素,而抗凝血作用低于肝素,且具有 皮下注射吸收良好、生物利用度高、體內(nèi)半衰期長、出血 傾向小等優(yōu)點(diǎn),目前已廣泛應(yīng)用于臨床。根據(jù)LMWH的來 源、生產(chǎn)工藝、末端結(jié)構(gòu)的不同,LMWH 分為許多不同 的種類,如達(dá)替肝素鈉、依諾肝素鈉、那曲肝素鈣、帕米 肝素鈉、汀肝素鈉等。達(dá)替肝素鈉(Dalteparin Sodium) 是低分子肝素的一種,由亞硝酸降解肝素得到,重均分子 量5600~6400,峰位分子量6000,硫酸化程度為2.0~ 2.5/雙糖單位
本實(shí)驗(yàn)使用陰離子交換色譜法測定游離硫酸根含 量,靈敏度高、選擇性好、快速。
測試條件
儀器:戴安ICS 1500離子色譜儀; 分析柱:IonPac AS11,250×4mm; 保護(hù)柱:IonPac AG11,50×4mm; 柱溫:30℃; 淋洗液:3. 0 mmol/L 碳酸鈉溶液; 流速:1.50 mL/min; 定量環(huán):25 µL 抑制器:ASRS300 4 mm,自循環(huán)模式,電流為23 mA
檢測方式:抑制型電導(dǎo)
樣品前處理
精密稱取達(dá)替肝素鈉20 mg,加水溶解并稀釋至 10 mL,過0.22 µm濾膜。
結(jié)果和討論
樣品濃度的選擇
達(dá)替肝素鈉為多糖,在實(shí)驗(yàn)條件下保留在色譜柱上, 不能被洗脫。樣品濃度為2 mg/mL時(shí),連續(xù)進(jìn)樣10次,硫 酸根保留時(shí)間可提前0.3 min。為提高實(shí)驗(yàn)的穩(wěn)定性,延 長色譜柱使用時(shí)間,可在滿足定量限的前提下,適當(dāng)降低 達(dá)替肝素鈉的濃度。
色譜柱的選擇及淋洗液梯度條件優(yōu)化
樣品中盡含有氯離子和硫酸根離子,非常易于分離。 本實(shí)驗(yàn)選用IonPac AS11色譜柱、3.0 mmol/L碳酸鈉溶液 作為淋洗液,操作簡單。
重現(xiàn)性、線性和靈敏度
取達(dá)替肝素鈉樣品,平行處理六份,在選定的色譜 條件下進(jìn)行分離分析,硫酸根的重現(xiàn)性較好,峰面積、 保留時(shí)間、峰高的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)均低于5%。 選擇一個(gè)樣品重復(fù)六次進(jìn)樣,硫酸根的保留時(shí)間、峰面 積和峰高的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)均低于5%,其結(jié)果 見表1。
在選定色譜條件下配制適宜濃度范圍的離子標(biāo)準(zhǔn)曲 線,硫酸根在0.1~40 mg/L范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系, 其線性相關(guān)系數(shù)r=0.9995。在本實(shí)驗(yàn)條件下,基線噪音 約為1.0 nS,根據(jù)三倍基線噪音計(jì)算出方法對硫酸根的定 量限為31.7 µg/L,折合樣品中硫酸根含量0.00015%。
實(shí)際樣品分析及加標(biāo)回收
取達(dá)替肝素鈉樣品測定并進(jìn)行加標(biāo)實(shí)驗(yàn),硫酸根的 加標(biāo)回收率依次在99~102%之間。樣品檢測結(jié)果見表2。
結(jié)論
采用本方法可以方便、快捷、準(zhǔn)確檢測達(dá)替肝素鈉 中的硫酸鹽,操作較為簡單,方法重現(xiàn)性較好,結(jié)果可 靠。本實(shí)驗(yàn)所使用的色譜柱AS11同時(shí)可用于肝素鈉其它 檢測項(xiàng)目如多硫酸軟骨素等項(xiàng)目的檢測
相關(guān)產(chǎn)品
免責(zé)聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來源:化工儀器網(wǎng)”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品,未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的,應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用,并注明“來源:化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者,本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源(非化工儀器網(wǎng))的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對其真實(shí)性負(fù)責(zé),不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí),必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源,并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題,請?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。