熒光定量PCR檢測(cè)技術(shù)從誕生到現(xiàn)在已經(jīng)有 8 年了，但是其應(yīng)用在近四年才迅猛增長(zhǎng)。在 Medline 數(shù)據(jù)庫(kù)中，用“ Taqman” 或 ”real time PCR” 作為關(guān)鍵詞檢索，在1996 年僅有 19 篇，在 1997 年僅有 28 篇，在 98 、 99 、2000 年分別達(dá)到了 52 、 157 、 409 篇， 2003 年已經(jīng)達(dá)到2984 篇，相信在不久的將來(lái)會(huì)有更多的文章發(fā)表。針對(duì)實(shí)時(shí) PCR 這一熱點(diǎn)領(lǐng)域，閃晶公司對(duì)它進(jìn)行了深入細(xì)致的研究，并且及時(shí)地為廣大科研人員推出這項(xiàng)技術(shù)服務(wù)。

熒光定量PCR基本原理

•  Taqman 技術(shù)：該技術(shù)以美國(guó) ABI 公司為代表。 PCR 擴(kuò)增時(shí)，在加入一對(duì)引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針。該探針為一直線型的寡核苷酸，兩端分別標(biāo)記一個(gè)熒光報(bào)告基團(tuán)和一個(gè)熒光淬滅基團(tuán)，探針完整時(shí)，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收， PCR 儀檢測(cè)不到熒光信號(hào)； PCR 擴(kuò)增時(shí)（在延伸階段）， Taq 酶的 5'' － 3'' 外切酶活性將探針酶切降解，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào)，即每擴(kuò)增一條 DNA 鏈，就有一個(gè)熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與 PCR 產(chǎn)物形成*同步，這也是定量的基礎(chǔ)所在。

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