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A549/DDP細(xì)胞|A549/DDP人肺癌順鉑耐藥株

來(lái)源:上海琛藝實(shí)業(yè)有限公司   2019年06月04日 08:47  

A549/DDP細(xì)胞|A549/DDP人肺癌順鉑耐藥株

【中文縮寫(xiě)】A549/DDP

【中文名稱(chēng)】A549/DDP人肺癌順鉑耐藥株

【背景資料】 見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)

【產(chǎn)品來(lái)源】 細(xì)胞主要來(lái)源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國(guó)內(nèi)外大學(xué)建系

"公司提供貼壁、半貼壁、懸浮、半懸浮、貼壁與懸浮混合等細(xì)胞特性,一般細(xì)胞培養(yǎng)FBS

量是10%,如果出現(xiàn)細(xì)胞狀態(tài)不良情況,可以提高FBS量到15%,22RV1人前列腺癌細(xì)胞待細(xì)胞穩(wěn)定后,調(diào)回FBS量10%,對(duì)于初次實(shí)驗(yàn)者,一般細(xì)胞培養(yǎng),都需要加入雙抗防止細(xì)胞污染,細(xì)胞匯合度達(dá)到90%,我們開(kāi)始寄送,這樣可以保持細(xì)胞收到時(shí),良好的細(xì)

胞活力。

 

  • 售前
        上海琛藝專(zhuān)業(yè)為國(guó)內(nèi)科研提供高品質(zhì)細(xì)胞和服務(wù),QC檢測(cè)合格后發(fā)貨保證細(xì)胞狀態(tài)良好,發(fā)貨前保證質(zhì)量。
     
    二、售后
        收到細(xì)胞7天內(nèi)出現(xiàn)狀態(tài)不佳等情況請(qǐng)及時(shí)反饋,會(huì)有技術(shù)同步指導(dǎo)操作協(xié)助解決,如仍未養(yǎng)活免費(fèi)重發(fā)。建議及時(shí)保種,有備無(wú)患!
     
    三、細(xì)胞生長(zhǎng)條件:

 

 HUVEC細(xì)胞 人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞 含STR鑒定


四、細(xì)胞收到后處理
    細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿(mǎn)*培養(yǎng)液并封好瓶口是細(xì)胞運(yùn)輸?shù)霓k法。收到細(xì)胞回到自己的實(shí)驗(yàn)室后,先打開(kāi)外包裝,用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超凈臺(tái)內(nèi),嚴(yán)格無(wú)菌操作。鏡下觀察:未超過(guò)80%匯合度時(shí),可將瓶裝的*培養(yǎng)液移入廢液缸中,原瓶(T25瓶)保留6-8ml*培養(yǎng)液,懸浮細(xì)胞需離心處理,放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng);超過(guò)80%匯合度時(shí),根據(jù)情況傳代或者凍存,具體操作見(jiàn)細(xì)胞培養(yǎng)步驟。
 
五、細(xì)胞培養(yǎng)步驟
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中,加入約6ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過(guò)夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
 
1、貼壁細(xì)胞,傳代參考如下:
①. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
②. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
③. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。 
④. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 
2、懸浮細(xì)胞,傳代參考如下:
方法①:收集細(xì)胞,1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法②:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
 
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,進(jìn)行離心收集,1000RPM條件下離心5分鐘,去除上清,按凍存數(shù)量加入血清及DMSO,凍存比例為90%FBS+10%DMSO。
 
A549/DDP細(xì)胞|A549/DDP人肺癌順鉑耐藥株
   剛收到細(xì)胞時(shí),胎牛血清可以用15%培養(yǎng)兩三天,利于細(xì)胞盡快恢復(fù)狀態(tài),細(xì)胞穩(wěn)定后
再調(diào)回10%即可
   收到細(xì)胞后如細(xì)胞狀態(tài)不佳,或培養(yǎng)中遇到問(wèn)題,煩請(qǐng)當(dāng)天盡快聯(lián)系,以便處理。當(dāng)天及時(shí)反饋細(xì)胞情況和細(xì)胞照片是售后跟蹤處理重要參考依據(jù),請(qǐng)您務(wù)必重視。

"細(xì)胞培養(yǎng)三不要:

養(yǎng)科研細(xì)胞是生物醫(yī)學(xué)研究的基本功。有三個(gè)小經(jīng)驗(yàn)可以和大家分享一下:

1. 不要燒瓶口。大多數(shù)人都喜歡在酒精燈的火焰上關(guān)瓶子,覺(jué)得這樣可以避免污染。不知道大家是不是有培養(yǎng)基怎么越用越發(fā)紫的困惑?知道為什么嗎?燒瓶口燒的。培養(yǎng)基一般都是用碳酸/碳酸氫跟作緩沖體系。瓶口在火焰上的時(shí)候,熾熱的空氣進(jìn)入瓶?jī)?nèi)。塞緊塞子放入冰箱后,空氣變冷,壓力驟降,培養(yǎng)基中的碳酸就會(huì)轉(zhuǎn)化成二氧化碳,釋放出來(lái)。培養(yǎng)基中的碳酸少了,當(dāng)然會(huì)變堿。如果不燒瓶口的話(huà),你會(huì)發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液變堿的速度會(huì)大大減慢。(當(dāng)然多多少少還是會(huì)有一點(diǎn)越用越堿,因?yàn)槭覝剡€是比冰箱內(nèi)的溫度高)

其實(shí)燒瓶口防止污染純粹是心理安慰。不妨試一下把手指在火上晃幾下,你會(huì)發(fā)現(xiàn)根本就不會(huì)燒疼。如果有細(xì)菌的話(huà),這么晃兩下也燒不死多少。要想燒死全部細(xì)菌,除非把瓶口和塞子燒紅。我在國(guó)內(nèi)從來(lái)就不燒瓶口。來(lái)美國(guó)以后發(fā)現(xiàn)這里更*,超凈臺(tái)內(nèi)根本就不點(diǎn)酒精燈。

2. 不要頻繁看細(xì)胞。對(duì)于初學(xué)者而言,養(yǎng)細(xì)胞就像養(yǎng)孩子一樣,有空就要去看看。細(xì)胞越是養(yǎng)不好,就越是經(jīng)常去看。實(shí)際上看細(xì)胞對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)沒(méi)有任何好處,特別是對(duì)原代細(xì)胞或是免疫磁珠分選后,密度特別低的細(xì)胞。培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)因子是非常有限的。細(xì)胞好不容易自分泌一點(diǎn)兒促生長(zhǎng)的因子在其周?chē)纬捎欣谏L(zhǎng)的局部環(huán)境。你跑去看細(xì)胞,培養(yǎng)瓶這么一晃,把因子都給晃散了。經(jīng)??梢钥吹叫率忠惶斓酵矶荚诳醇?xì)胞,細(xì)胞老是長(zhǎng)不好。老手細(xì)胞一扔好幾天不管,細(xì)胞瘋長(zhǎng)。

3. 不要怕消化。

人源細(xì)胞系在傳代的時(shí)候,初學(xué)者往往生怕細(xì)胞消化過(guò)度,早早地終止消化。細(xì)胞沒(méi)下來(lái)就使勁吹燈,吹得滿(mǎn)瓶子都是氣泡。在我看來(lái),用力吹打?qū)?xì)胞的損傷比消化更大。我?guī)熜衷谧鲅芷交≡臅r(shí)候,37度消化過(guò)夜,細(xì)胞也沒(méi)事。我一般是等細(xì)胞*變圓后才中止消化。細(xì)胞輕輕一晃就能下來(lái)。還有,動(dòng)作要輕柔,盡量不要產(chǎn)生氣泡。氣泡在破裂時(shí)的應(yīng)力相當(dāng)大,對(duì)細(xì)胞的傷害也是很大的。" 詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)

傳代方法: 建議1:2-1:3 兩天換液一次

凍存條件: 詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)

上海琛藝實(shí)業(yè)有限公司上千株細(xì)胞由本公司專(zhuān)業(yè)的技術(shù)人員自己培養(yǎng),其中幾百株人源細(xì)胞已通過(guò)(STR鑒定),細(xì)胞現(xiàn)*,需要下單請(qǐng)咨詢(xún)銷(xiāo)售李。。。。。

A549/DDP 人肺癌順鉑耐藥株
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