A549/DDP細胞|A549/DDP人肺癌順鉑耐藥株

【中文縮寫】A549/DDP

【中文名稱】A549/DDP人肺癌順鉑耐藥株

【背景資料】 見細胞說明書

【產品來源】 細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數國內外大學建系

"公司提供貼壁、半貼壁、懸浮、半懸浮、貼壁與懸浮混合等細胞特性，一般細胞培養(yǎng)FBS

量是10%，如果出現(xiàn)細胞狀態(tài)不良情況，可以提高FBS量到15%，22RV1人前列腺癌細胞待細胞穩(wěn)定后，調回FBS量10%，對于初次實驗者，一般細胞培養(yǎng)，都需要加入雙抗防止細胞污染，細胞匯合度達到90%，我們開始寄送，這樣可以保持細胞收到時，良好的細

胞活力。

• 售前
      上海琛藝專業(yè)為國內科研提供高品質細胞和服務，QC檢測合格后發(fā)貨保證細胞狀態(tài)良好，發(fā)貨前保證質量。
   
  二、售后
      收到細胞7天內出現(xiàn)狀態(tài)不佳等情況請及時反饋，會有技術同步指導操作協(xié)助解決，如仍未養(yǎng)活免費重發(fā)。建議及時保種，有備無患！
   
  三、細胞生長條件：

 HUVEC細胞 人臍靜脈血管內皮細胞 含STR鑒定

四、細胞收到后處理
    細胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿*培養(yǎng)液并封好瓶口是細胞運輸的辦法。收到細胞回到自己的實驗室后，先打開外包裝，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內，嚴格無菌操作。鏡下觀察：未超過80%匯合度時，可將瓶裝的*培養(yǎng)液移入廢液缸中，原瓶（T25瓶）保留6-8ml*培養(yǎng)液，懸浮細胞需離心處理，放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)；超過80%匯合度時，根據情況傳代或者凍存，具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。
 
五、細胞培養(yǎng)步驟
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入6cm皿中，加入約6ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
 
1、貼壁細胞，傳代參考如下：
①. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
②. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
③. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。 
④. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 
2、懸浮細胞，傳代參考如下：
方法①：收集細胞，1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法②：可選擇半數換液方式，棄去半數培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
 
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，進行離心收集，1000RPM條件下離心5分鐘，去除上清，按凍存數量加入血清及DMSO，凍存比例為90%FBS+10%DMSO。
 A549/DDP細胞|A549/DDP人肺癌順鉑耐藥株
   剛收到細胞時，胎牛血清可以用15%培養(yǎng)兩三天，利于細胞盡快恢復狀態(tài)，細胞穩(wěn)定后
再調回10%即可
   收到細胞后如細胞狀態(tài)不佳，或培養(yǎng)中遇到問題，煩請當天盡快聯(lián)系，以便處理。當天及時反饋細胞情況和細胞照片是售后跟蹤處理重要參考依據，請您務必重視。

"細胞培養(yǎng)三不要：

養(yǎng)科研細胞是生物醫(yī)學研究的基本功。有三個小經驗可以和大家分享一下：

1. 不要燒瓶口。大多數人都喜歡在酒精燈的火焰上關瓶子，覺得這樣可以避免污染。不知道大家是不是有培養(yǎng)基怎么越用越發(fā)紫的困惑？知道為什么嗎？燒瓶口燒的。培養(yǎng)基一般都是用碳酸/碳酸氫跟作緩沖體系。瓶口在火焰上的時候，熾熱的空氣進入瓶內。塞緊塞子放入冰箱后，空氣變冷，壓力驟降，培養(yǎng)基中的碳酸就會轉化成二氧化碳，釋放出來。培養(yǎng)基中的碳酸少了，當然會變堿。如果不燒瓶口的話，你會發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液變堿的速度會大大減慢。（當然多多少少還是會有一點越用越堿，因為室溫還是比冰箱內的溫度高）

其實燒瓶口防止污染純粹是心理安慰。不妨試一下把手指在火上晃幾下，你會發(fā)現(xiàn)根本就不會燒疼。如果有細菌的話，這么晃兩下也燒不死多少。要想燒死全部細菌，除非把瓶口和塞子燒紅。我在國內從來就不燒瓶口。來美國以后發(fā)現(xiàn)這里更*，超凈臺內根本就不點酒精燈。

2. 不要頻繁看細胞。對于初學者而言，養(yǎng)細胞就像養(yǎng)孩子一樣，有空就要去看看。細胞越是養(yǎng)不好，就越是經常去看。實際上看細胞對細胞的生長沒有任何好處，特別是對原代細胞或是免疫磁珠分選后，密度特別低的細胞。培養(yǎng)基中的生長因子是非常有限的。細胞好不容易自分泌一點兒促生長的因子在其周圍，形成有利于生長的局部環(huán)境。你跑去看細胞，培養(yǎng)瓶這么一晃，把因子都給晃散了。經?？梢钥吹叫率忠惶斓酵矶荚诳醇毎?，細胞老是長不好。老手細胞一扔好幾天不管，細胞瘋長。

3. 不要怕消化。

人源細胞系在傳代的時候，初學者往往生怕細胞消化過度，早早地終止消化。細胞沒下來就使勁吹燈，吹得滿瓶子都是氣泡。在我看來，用力吹打對細胞的損傷比消化更大。我?guī)熜衷谧鲅芷交≡臅r候，37度消化過夜，細胞也沒事。我一般是等細胞*變圓后才中止消化。細胞輕輕一晃就能下來。還有，動作要輕柔，盡量不要產生氣泡。氣泡在破裂時的應力相當大，對細胞的傷害也是很大的。" 詳見細胞說明書

傳代方法： 建議1:2-1:3 兩天換液一次

凍存條件： 詳見細胞說明書

上海琛藝實業(yè)有限公司上千株細胞由本公司專業(yè)的技術人員自己培養(yǎng)，其中幾百株人源細胞已通過（STR鑒定），細胞現(xiàn)*，需要下單請咨詢銷售李。。。。。