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A549/DDP細胞|A549/DDP人肺癌順鉑耐藥株

來源:上海琛藝實業(yè)有限公司   2019年06月04日 08:47  

A549/DDP細胞|A549/DDP人肺癌順鉑耐藥株

【中文縮寫】A549/DDP

【中文名稱】A549/DDP人肺癌順鉑耐藥株

【背景資料】 見細胞說明書

【產品來源】 細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數國內外大學建系

"公司提供貼壁、半貼壁、懸浮、半懸浮、貼壁與懸浮混合等細胞特性,一般細胞培養(yǎng)FBS

量是10%,如果出現(xiàn)細胞狀態(tài)不良情況,可以提高FBS量到15%,22RV1人前列腺癌細胞待細胞穩(wěn)定后,調回FBS量10%,對于初次實驗者,一般細胞培養(yǎng),都需要加入雙抗防止細胞污染,細胞匯合度達到90%,我們開始寄送,這樣可以保持細胞收到時,良好的細

胞活力。

 

  • 售前
        上海琛藝專業(yè)為國內科研提供高品質細胞和服務,QC檢測合格后發(fā)貨保證細胞狀態(tài)良好,發(fā)貨前保證質量。
     
    二、售后
        收到細胞7天內出現(xiàn)狀態(tài)不佳等情況請及時反饋,會有技術同步指導操作協(xié)助解決,如仍未養(yǎng)活免費重發(fā)。建議及時保種,有備無患!
     
    三、細胞生長條件:

 

 HUVEC細胞 人臍靜脈血管內皮細胞 含STR鑒定


四、細胞收到后處理
    細胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿*培養(yǎng)液并封好瓶口是細胞運輸的辦法。收到細胞回到自己的實驗室后,先打開外包裝,用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內,嚴格無菌操作。鏡下觀察:未超過80%匯合度時,可將瓶裝的*培養(yǎng)液移入廢液缸中,原瓶(T25瓶)保留6-8ml*培養(yǎng)液,懸浮細胞需離心處理,放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng);超過80%匯合度時,根據情況傳代或者凍存,具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。
 
五、細胞培養(yǎng)步驟
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將細胞懸液加入6cm皿中,加入約6ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
 
1、貼壁細胞,傳代參考如下:
①. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
②. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
③. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。 
④. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 
2、懸浮細胞,傳代參考如下:
方法①:收集細胞,1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法②:可選擇半數換液方式,棄去半數培養(yǎng)基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
 
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,進行離心收集,1000RPM條件下離心5分鐘,去除上清,按凍存數量加入血清及DMSO,凍存比例為90%FBS+10%DMSO。
 
A549/DDP細胞|A549/DDP人肺癌順鉑耐藥株
   剛收到細胞時,胎牛血清可以用15%培養(yǎng)兩三天,利于細胞盡快恢復狀態(tài),細胞穩(wěn)定后
再調回10%即可
   收到細胞后如細胞狀態(tài)不佳,或培養(yǎng)中遇到問題,煩請當天盡快聯(lián)系,以便處理。當天及時反饋細胞情況和細胞照片是售后跟蹤處理重要參考依據,請您務必重視。

"細胞培養(yǎng)三不要:

養(yǎng)科研細胞是生物醫(yī)學研究的基本功。有三個小經驗可以和大家分享一下:

1. 不要燒瓶口。大多數人都喜歡在酒精燈的火焰上關瓶子,覺得這樣可以避免污染。不知道大家是不是有培養(yǎng)基怎么越用越發(fā)紫的困惑?知道為什么嗎?燒瓶口燒的。培養(yǎng)基一般都是用碳酸/碳酸氫跟作緩沖體系。瓶口在火焰上的時候,熾熱的空氣進入瓶內。塞緊塞子放入冰箱后,空氣變冷,壓力驟降,培養(yǎng)基中的碳酸就會轉化成二氧化碳,釋放出來。培養(yǎng)基中的碳酸少了,當然會變堿。如果不燒瓶口的話,你會發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液變堿的速度會大大減慢。(當然多多少少還是會有一點越用越堿,因為室溫還是比冰箱內的溫度高)

其實燒瓶口防止污染純粹是心理安慰。不妨試一下把手指在火上晃幾下,你會發(fā)現(xiàn)根本就不會燒疼。如果有細菌的話,這么晃兩下也燒不死多少。要想燒死全部細菌,除非把瓶口和塞子燒紅。我在國內從來就不燒瓶口。來美國以后發(fā)現(xiàn)這里更*,超凈臺內根本就不點酒精燈。

2. 不要頻繁看細胞。對于初學者而言,養(yǎng)細胞就像養(yǎng)孩子一樣,有空就要去看看。細胞越是養(yǎng)不好,就越是經常去看。實際上看細胞對細胞的生長沒有任何好處,特別是對原代細胞或是免疫磁珠分選后,密度特別低的細胞。培養(yǎng)基中的生長因子是非常有限的。細胞好不容易自分泌一點兒促生長的因子在其周圍,形成有利于生長的局部環(huán)境。你跑去看細胞,培養(yǎng)瓶這么一晃,把因子都給晃散了。經??梢钥吹叫率忠惶斓酵矶荚诳醇毎?,細胞老是長不好。老手細胞一扔好幾天不管,細胞瘋長。

3. 不要怕消化。

人源細胞系在傳代的時候,初學者往往生怕細胞消化過度,早早地終止消化。細胞沒下來就使勁吹燈,吹得滿瓶子都是氣泡。在我看來,用力吹打對細胞的損傷比消化更大。我?guī)熜衷谧鲅芷交≡臅r候,37度消化過夜,細胞也沒事。我一般是等細胞*變圓后才中止消化。細胞輕輕一晃就能下來。還有,動作要輕柔,盡量不要產生氣泡。氣泡在破裂時的應力相當大,對細胞的傷害也是很大的。" 詳見細胞說明書

傳代方法: 建議1:2-1:3 兩天換液一次

凍存條件: 詳見細胞說明書

上海琛藝實業(yè)有限公司上千株細胞由本公司專業(yè)的技術人員自己培養(yǎng),其中幾百株人源細胞已通過(STR鑒定),細胞現(xiàn)*,需要下單請咨詢銷售李。。。。。

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