就讓我們以 N,N-二甲基-3-氯丙胺鹽酸鹽中基因毒性雜質(zhì) 1,3-溴氯丙烷的檢測(cè)為典型案例，了解下華海制藥如何采用 Agilent Intuvo 9000 氣相色譜系統(tǒng)配備單四極桿質(zhì)譜檢測(cè)器（ Intuvo GC/MSD ）攻克基因毒性物質(zhì)檢測(cè)這一難題。

華海藥業(yè)，創(chuàng)立于 1989 年，總部位于中國(guó)浙江，業(yè)務(wù)覆蓋化學(xué)藥、生物藥、醫(yī)藥包裝、貿(mào)易流通等多個(gè)領(lǐng)域，與500多家制藥企業(yè)建立了長(zhǎng)期合作關(guān)系，為近 200 個(gè)國(guó)家和地區(qū)提供醫(yī)療健康產(chǎn)品。自創(chuàng)立以來(lái)，華海制藥人一直堅(jiān)守著“確保每一顆藥片都是‘安全’，確保每一顆膠囊都是‘可靠’！”的承諾。在有效控制基因毒性物質(zhì)方面，以王春華為代表的華海制藥人也從未退縮，一直在研究道路上不斷探索、創(chuàng)新、砥礪前行。

圖 1. 王春華等華海制藥工作人員合影 

基因毒性雜質(zhì) 1,3-溴氯丙烷的傳統(tǒng)分析方法是采用 GC-FID 進(jìn)行檢測(cè)，但該方法實(shí)驗(yàn)操作繁瑣，重復(fù)性較差，且樣品基質(zhì)對(duì) 1,3-溴氯丙烷的檢測(cè)有干擾，使得 1,3-溴氯丙烷的含量檢測(cè)不準(zhǔn)確，以至于無(wú)法真實(shí)體現(xiàn)出樣品的質(zhì)量。

但這點(diǎn)困難可難不倒華海制藥人，在安捷倫儀器的助力下，王春華及他的團(tuán)隊(duì)現(xiàn)已成功自主開(kāi)發(fā)出了新的雜質(zhì) 1,3-溴氯丙烷排查分析方法，并有效應(yīng)用于監(jiān)控產(chǎn)品質(zhì)量。此方法采用 Agilent Intuvo 9000 氣相色譜系統(tǒng)配備5977B單四極桿質(zhì)譜檢測(cè)器（ Intuvo GC/MSD ）對(duì)基因毒性雜質(zhì) 1,3-溴氯丙烷進(jìn)行檢測(cè)，目標(biāo)物峰形良好、可有效與樣品中的雜質(zhì)進(jìn)行分離，并得到準(zhǔn)確的測(cè)定結(jié)果。

表 1. 目標(biāo)化合物的結(jié)構(gòu)式 

 

為了進(jìn)一步確認(rèn)該方法的有效性和可行性，對(duì)該方法在實(shí)驗(yàn)室的適用性進(jìn)行了驗(yàn)證：

1. 建立分析條件

經(jīng)過(guò)不斷實(shí)驗(yàn)和調(diào)整，獲得了 Intuvo GC/MSD 色譜條件，這是由 Intuvo GC/MSD 檢測(cè)基因毒素物質(zhì)的新方法。

• 系統(tǒng)信息: Agilent Intuvo 9000 氣相色譜系統(tǒng) + 5977B 單四極桿氣質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng) + 7650A 自動(dòng)液體進(jìn)樣器 + HSS7697A 頂空進(jìn)樣器

• 系統(tǒng)優(yōu)勢(shì): 同一個(gè)序列可同時(shí)進(jìn)行液體進(jìn)樣和頂空進(jìn)樣，無(wú)需任何硬件更改或調(diào)整

• 方法總評(píng): 與其它系統(tǒng)相比，Intuvo GC/MSD 的重現(xiàn)性較好，且易于分析難分離的物質(zhì)，非常適用于復(fù)雜化合物的定性、定量分析。且在 Intuvo 超惰性流路、7650A 、HSS 7697A 的助力下，液體進(jìn)樣和頂空進(jìn)樣之間無(wú)需任何調(diào)整，盡顯智能、便捷等諸多優(yōu)勢(shì)!

2. 色譜分離結(jié)果

相比于傳統(tǒng)的 GC-FID 的方法，新的 Intuvo GC/MSD 方法顯著地改善了色譜譜圖的峰形和對(duì)稱性，避免了樣品基質(zhì)對(duì) 1,3-溴氯丙烷檢測(cè)的干擾，從而有利于提高數(shù)據(jù)重現(xiàn)性。

圖 2. 采用新的 Intuvo GC/MSD 方法分析 1,3-溴氯丙烷所得到的色譜譜圖 

3. 方法檢測(cè)限和定量限

得益于 Intuvo 9000 的超惰性流路設(shè)計(jì)，本方法具有優(yōu)異的 1,3-溴氯丙烷方法定量限 LOQ ( limit of quantitation )和檢測(cè)限 LOD ( limit of detection ) ，*產(chǎn)品質(zhì)控的需求。

表 2. 1,3-溴氯丙烷的 LOQ 和 LOD 

 

4. 新舊方法對(duì)比

經(jīng)過(guò)各項(xiàng)指標(biāo)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)乜甲C，新方法的各項(xiàng)內(nèi)容均合格并優(yōu)于傳統(tǒng)的 GC-FID 的方法，并表現(xiàn)出較好的專屬性和靈敏度。

表 3. 新方法的各項(xiàng)分析值

 

5. 系統(tǒng)適應(yīng)性

在系統(tǒng)適應(yīng)性考察過(guò)程中，要求連續(xù)進(jìn)樣 5 針標(biāo)準(zhǔn)溶液 50.58 ng/ml 所得到的 1,3-溴氯丙烷峰面積的 RSD 值 ≤ 5.0%，而實(shí)測(cè)的新方法 RSD 值為 1.7% ; 要求連續(xù)進(jìn)樣 5 針標(biāo)準(zhǔn)溶液加程序控制溶液所得到的 1,3-溴氯丙烷峰面積的 RSD 值 ≤ 7.5%，而實(shí)測(cè)的新方法 RSD 值為 4.5%。程序控制溶液也叫質(zhì)控標(biāo)液，指標(biāo)準(zhǔn)溶液按照真實(shí)樣品的前處理程序完整地進(jìn)行前處理后所得到的溶液。通過(guò)上述結(jié)果可以得到, 新的 Intuvo GC/MSD 方法具有出色的重現(xiàn)性，且系統(tǒng)適用性*符合要求。

表 4. Intuvo GC/MSD 方法的系統(tǒng)適用性結(jié)果 

 

綜上所述，在基因毒性物質(zhì)排查這一制藥企業(yè)重點(diǎn)關(guān)注的應(yīng)用領(lǐng)域中，新的 Intuvo 9000 GC/MSD 方法在系統(tǒng)適應(yīng)性、專屬性和其它各項(xiàng)方法學(xué)驗(yàn)證指標(biāo)核查方面均具有優(yōu)異的表現(xiàn)，并用自身的實(shí)力再一次的證明了其在制藥質(zhì)量控制方面突出的“保駕護(hù)航”作用。而該方法如此優(yōu)異的性能，也再一次證明了 Agilent Intuvo 9000 氣相色譜系統(tǒng)超惰性流路及多項(xiàng)創(chuàng)新技術(shù)的優(yōu)勢(shì)。