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背景介紹 ??
外泌體（Exosome）是由活細(xì)胞分泌的直徑約為30-150 nm的小囊泡，具有典型的脂質(zhì)雙分子層結(jié)構(gòu)；存在于細(xì)胞培養(yǎng)上清液、血清、血漿、唾液、尿液、羊水以及其它生物體液中；外泌體攜帶有多種蛋白質(zhì)、脂類、DNA和RNA等重要信息，不僅在細(xì)胞與細(xì)胞間的物質(zhì)和信息傳遞中起重要作用，更有望成為多種疾病的早期診斷標(biāo)志物。
圖1：外泌體的分泌以及外泌體的組成
外泌體*的結(jié)構(gòu)，以及臨床應(yīng)用的良好前景，使得外泌體成了人們研究的熱點(diǎn)。外泌體的分離方法通常包括密度梯度離心、差速離心、體積排阻、免疫分離以及聚合物沉淀等方法，但是這些方法耗時(shí)、操作復(fù)雜以及成本高等問題往往會影響人們對外泌體抽提試劑盒的選擇。
外泌體不同提取方法的優(yōu)缺點(diǎn)對比 ??
提取方法 | 優(yōu)點(diǎn) | 缺點(diǎn) |
超速離心法 | 分離外泌體純度較高 | 操作繁瑣，耗時(shí)長 |
過濾離心 | 簡單、省時(shí)，不影響外泌體的生物活性 | 純度不足 |
密度梯度離心法 | 純度較高 | 前期準(zhǔn)備工作繁雜 |
親和層析分離法 | 純度高、重復(fù)性好 | 回收率低 |
外泌體沉降法 | 簡單、無需特殊設(shè)備 | 周期長、易沉淀非外泌體污染物 |
凝膠排阻法 | 操作簡單，分離外泌體純度高 | 技術(shù)難度略高，易染菌 |
免疫磁珠法 | 保證外泌體形態(tài)的完整、特異性高、操作簡單 | 生理性鹽濃度會影響外泌體生物活性 |
色譜法 | 得到的外泌體大小均一 | 設(shè)備特殊，價(jià)格高，應(yīng)用不廣泛 |
圖2：外泌體分離使用方法的統(tǒng)計(jì)
尋找一款簡單、高效、快速、經(jīng)濟(jì)的提取外泌體的試劑盒是提取外泌體當(dāng)務(wù)之急。
翌圣生物經(jīng)過匠心研發(fā)，推出的外泌體快速抽提試劑盒，可以在短時(shí)間內(nèi)獲得大量形態(tài)完好的外泌體，獲得的外泌體可用于下游外泌體標(biāo)記、電鏡分析、粒徑分析、Western Blot分析、熒光定量分析和二代測序等。
外泌體的分離鑒定 ??
試劑盒種類 | 貨號 | 適用范圍 |
HieffTM Quick exosome isolation kit (for Cell Culture Media) 細(xì)胞培養(yǎng)上清外泌體快速抽提試劑盒 | 41201ES25/50 | 細(xì)胞培養(yǎng)基上清、尿液、腹水、胸腔積液、腦脊液、唾液（需稀釋） |
HieffTM Quick exosome isolation kit (for Serum/Plasma) 血清/血漿外泌體快速抽提試劑盒 | 41202ES08 | 血清、血漿、乳汁、卵泡液 |
不同品牌外泌體提取價(jià)格對比 ??
FAQ ??
Q1：樣品在提取外泌體之前是否可以低溫保存？
A：可以。長期請保存于-80℃，無須加凍存液；短期（1-2天內(nèi)）則保存于4℃即可。
Q2：粘度過大的樣品如何處理？
A：如果樣品粘度過大時(shí)（因細(xì)胞分泌物較多所致），可將樣品用1×PBS緩沖液進(jìn)行等體積稀釋，混勻稀釋后的樣品再使用本試劑盒提取外泌體。
Q3：培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)，如何去除血清來源的外泌體？
A：多數(shù)情況下，細(xì)胞在體外培時(shí)養(yǎng)需要血清，而血清中一般都含有外泌體，為避免血清對細(xì)胞外泌體的污染，可采用以下兩種方法：
（1）將細(xì)胞培養(yǎng)用的血清通過1×105g超速離心10h以去除血清外泌體；
（2）選擇無血清培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。
Q4：無外泌體血清培養(yǎng)基（或者無血清培養(yǎng)基）在什么時(shí)候使用？
A：細(xì)胞在正常含血清的培養(yǎng)基中培養(yǎng)一定的時(shí)間后，細(xì)胞融合度約為60%-70%時(shí)，移去原有含血清的培養(yǎng)基，換成新鮮的無外泌體血清培養(yǎng)基（或者無血清培養(yǎng)基），繼續(xù)培養(yǎng)24-48h，細(xì)胞融合度達(dá)到80%-95%左右時(shí)收取上清,該上清液即可用于提取外泌體。
Q5：細(xì)胞培養(yǎng)過程中的死細(xì)胞是否會影響外泌體的提??？
A：會的。在收獲細(xì)胞時(shí)，應(yīng)確定死亡細(xì)胞占比不超過5%。細(xì)胞凋亡/死亡過程中會釋放大量大小不等的囊泡，它們在外泌體的提取純化過程中會污染活細(xì)胞產(chǎn)生的外泌體，同時(shí)有可能產(chǎn)生大量雜質(zhì)。
Q6：外泌體如何保存？
A：純化后的外泌體可于4℃保存不超過一周，-80℃條件下可長期保存，避免反復(fù)凍融。
Q7：如何鑒定提取的外泌體？
A：通常使用透射電鏡檢測（形態(tài)）、粒徑檢測（大?。?/span>Western blot檢測等方法鑒定提取的外泌體。在進(jìn)行Western blot檢測時(shí)，通常檢測外泌體標(biāo)志蛋白（CD63、CD9、CD81、TSG101等，優(yōu)先推薦CD63和Tsg101）。
Q8：組織細(xì)胞外泌體如何提??？
A：無菌環(huán)境下將組織剪成小塊（越小越好），然后在無血清的培養(yǎng)基中培養(yǎng)12h；將培養(yǎng)液轉(zhuǎn)移至離心管中，于4℃以3000g離心20 min去除培養(yǎng)液中雜質(zhì)和細(xì)胞碎片，將上清液轉(zhuǎn)移至新的離心管中；先使用0.45μm濾器過濾上清液，接著使用0.2μm濾器過濾上清液，再按照本試劑盒說明書提取外泌體。
Q9：血清（尤其是血漿）加了1×PBS重懸之后，沉淀不溶現(xiàn)象
A：血清樣本沉淀較為粘稠，可多次反復(fù)吹打，或者適當(dāng)增加1×PBS的用量。
產(chǎn)品訂購 ??
產(chǎn)品應(yīng)用 | 貨號 | 名稱 | 規(guī)格 | 價(jià)格（元） | *（元） |
外泌體分離 | 41202ES30 | HieffTM Quick exosome isolation kit (for Serum/Plasma)血清/血漿外泌體快速抽提試劑盒 | 30 mL | 2155 | - |
41201ES25/50 | HieffTM Quick xosome solation kit (for Cell Culture Media)細(xì)胞培養(yǎng)上清外泌體快速抽提試劑盒 | 25/50?mL | 2155/3855 | - | |
外泌體定量 | 20118ES60 | Lysis Buffer for WB/IP Assays免疫印跡及免疫沉淀用（WB/IP）裂解液 | 100 mL | 228 | - |
20201ES76 | BCA Protein Quantification Kit BCA蛋白濃度測定試劑盒（增強(qiáng)型） | 500 T(100 mL) | 288 | - | |
外泌體鑒定（Western Blot） | 41203ES05 | Exosome identification kit for Western Blot外泌體鑒定試劑盒 | 5T | 3683 | 3315 |
36230ES10 | Precast Protein Improve Gels, 8%-20%, 10 wells 8%-20%高分辨率梯度預(yù)制膠,10孔 | 1盒（10塊） | 573 | 378 | |
36231ES10 | Precast Protein Improve Gels,,4%-20%, 10 wells 4%-20%高分辨率梯度預(yù)制膠,10孔 | 1盒（10塊） | 573 | 378 | |
36232ES10 | Precast Protein Improve Gels,, 8%, 10 wells 8% 高分辨率梯度預(yù)制膠,10孔 | 1盒（10塊） | 573 | 378 | |
36233ES10 | Precast Protein Improve Gels,, 10%, 10 wells 10%高分辨率梯度預(yù)制膠,10孔 | 1盒（10塊） | 573 | 378 | |
36234ES10 | Precast Protein Improve Gels,, 12%, 10 wells 12%高分辨率梯度預(yù)制膠,10孔 | 1盒（10塊） | 573 | 378 | |
36235ES10 | Precast Protein Improve Gels,, 15%, 10 wells 15%高分辨率梯度預(yù)制膠,10孔 | 1盒（10塊） | 573 | 378 | |
20351ES76 | GoldBand 3-color Regular Range Protein Marker (10-180 kDa) 三色預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn) | 2×250 μL | 676 | 585 | |
20352ES76 | GoldBand 3-color High Range Protein Marker (10-245kDa) 三色預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn) | 2×250 μL | 786 | 615 | |
外泌體標(biāo)記 | 40725ES10/25 | DiO (DiOC18(3)) 細(xì)胞膜綠色熒光探針 | 10 mg/25 mg | 488/988 | - |
40726ES10 | DiI (DiIC18(3)) 細(xì)胞膜橙紅色熒光探針 | 10 mg | 398 | - | |
40757ES25 | DiR Iodide (DiIC18(7)) 細(xì)胞膜深紅色熒光探針 | 25 mg | 988 | - | |
40758ES25 | DiD Perchlorate (DiIC18(5)) 細(xì)胞膜紅色熒光探針 | 25 mg | 988 | - |
HB20210727
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