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HCT15/Fu人結直腸癌氟尿嘧啶耐藥株 含STR鑒定

來源:上海琛藝實業(yè)有限公司   2019年07月02日 10:42  

HCT15/Fu人結直腸癌氟尿嘧啶耐藥株 含STR鑒定                            

 

細胞介紹

4T1 是從410.4瘤株中未經誘變篩得的6-硫鳥嘌噙抗性細胞株。當注射到BALB/c 小鼠中時,4T1自發(fā)產生高轉移腫瘤,可轉移到肺,肝,淋巴結和大腦,同時在注射部位形成始發(fā)灶。誘導轉移時不需要摘除始發(fā)灶。4T1細胞在BALB/c小鼠中的生長與轉移特性與人體中的乳腺癌十分相近。這種腫瘤是人VI期乳腺癌的動物模型。4T1-誘導的腫瘤在手術后及未手術情況下轉移的動力學相近,可以用作手術后及未手術模型。 跟其他腫瘤模型相比,由于4T1的抗6-硫鳥嘌噙特性,微小的轉移細胞團(少到僅僅1)也可以在許多遠端器官中檢測到。

 

細胞特性

  1. 來源:小鼠乳腺癌
  2. 形態(tài):上皮細胞樣
  3. 含量:>1x106 /mL
  4. 污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
  5. 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

 

運輸和保存:可選擇干冰運輸及發(fā)送復蘇存活細胞方式:(1)干冰運輸,收到后立即轉入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復蘇;(2)存活細胞,收到后應繼續(xù)生長,傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時,再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。

收到細胞后請拍照,3天內如果發(fā)現(xiàn)污染,請及時拍照與我們聯(lián)系。

 

細胞用途:僅供科研使用。

HCT15/Fu人結直腸癌氟尿嘧啶耐藥株 含STR鑒定 

細胞接收后的處理:

1 收到細胞后,請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時聯(lián)系我們。

2 在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)時,在低倍鏡(45X物鏡)下進行,能準確判斷細胞的傳代密度??醇毎男螒B(tài)請在10X20×物鏡下,同時給細胞拍照各2-3張(10×,20×都要拍照),作為售后的依據。

3 觀察好細胞狀態(tài)后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h。

4 貼壁細胞:在運輸過程中貼壁細胞會有脫落的現(xiàn)象,如發(fā)現(xiàn)貼壁細胞有脫落或者脫落后抱團生長,可將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和未貼壁細胞1000rpm離心5分鐘,棄去上清重懸后接種到加有按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基的原培養(yǎng)瓶中(或新的培養(yǎng)瓶中)。

5 懸浮細胞:T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細胞1000rpm離心5分鐘,棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中(加入按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基)。

備注:運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞,請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。  收到細胞后次傳代建議12傳代 。

                      

 

細胞培養(yǎng)步驟

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:

  1. 準備RPMI-1640(推薦iCell-0002)培養(yǎng)基;胎牛血清,10%;雙抗,1%。
  2. 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
  3. 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。
    • 細胞處理:
  4. 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
  5. 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
  6.  

1.      棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2.      2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3.      6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4 . 收到細胞后傳代推薦將細胞懸液按12的比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,建議客戶凍存一支備用,后續(xù)傳代根據實際情況按1:21:5的比例進行。

3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。

下面T25瓶為類;

      1,細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗一遍后加入1ml胰酶,細胞變圓脫落后,加入1ml含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。

      2,4min 1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細胞,根據細胞數(shù)量加入血清和DMSO,輕輕混勻,DMSO終濃度為10%,細胞密度不低于1x10E6/ml,每支凍存管凍存1ml細胞懸液,注意凍存管做好標識。

      3,將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

 

 

注意事項:

1. 收到細胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。

2. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

 

 

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