液相色譜流動(dòng)相使用時(shí)的壞習(xí)慣
先來(lái)了解下，流動(dòng)相，色譜過(guò)程中攜帶待測(cè)組分向前移動(dòng)的物質(zhì)稱(chēng)為流動(dòng)相。與固定相處于平衡狀態(tài)、帶動(dòng)樣品向前移動(dòng)的另一相。用作流動(dòng)相的物質(zhì)有：氣體、液體、臨界流體等。常見(jiàn)的流動(dòng)相主要有：乙腈-水溶液、乙腈-酸水溶液、甲醇-水溶液、乙腈-磷酸水溶液等。

液相色譜是樣品組分在柱填料與流動(dòng)相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的，因此要求流動(dòng)相具備以下的特點(diǎn)：

（1）流動(dòng)相對(duì)樣品具有一的溶解能力，保樣品組分不會(huì)沉淀在柱中(或長(zhǎng)時(shí)間保留在柱中)。

（2）流動(dòng)相與樣品不產(chǎn)生，化學(xué)反應(yīng)

（3）流動(dòng)相的黏度要盡量小，以便得到好的分離果；降柱壓降，延泵的使用壽命(可運(yùn)用提溫度的方法降流動(dòng)相的黏度)。

（4）流動(dòng)相的物化性質(zhì)要與使用的檢測(cè)器相適應(yīng)。如使用UV檢測(cè)器， 好使用對(duì)紫外吸收較低的溶劑配制。

（5）流動(dòng)相沸點(diǎn)不要太低，否則容易產(chǎn)生氣泡，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)無(wú)法進(jìn)行。

（6）在流動(dòng)相配制好后，一要進(jìn)行脫氣。除去溶解在流動(dòng)相中的微氣體既利于檢測(cè)，還可以止流動(dòng)相中的量氧與樣品發(fā)生作用。



在流動(dòng)相使用過(guò)程中有些所不為的習(xí)慣

1加入有機(jī)相之后再測(cè)量流動(dòng)相的PH值

通常情況下測(cè)量流動(dòng)相的PH值，是測(cè)量水相中的PH值參數(shù)。有機(jī)相加入之后PH值參數(shù)的測(cè)量就和之前有誤差。

PS：但如果能保每次測(cè)量都是加入相同量的有相之后得到的PH值，雖然這不能保確度，但是這能保前后一的測(cè)量結(jié)果，所以這樣也沒(méi)有問(wèn)題。



2沒(méi)有進(jìn)行流動(dòng)相的過(guò)濾、流動(dòng)相的脫氣。

配制好的流動(dòng)相在使用前一要先用0.5um孔徑的微孔濾膜來(lái)過(guò)濾。這是因?yàn)槿芤褐泻泻芏嗳庋垭y發(fā)現(xiàn)的微小顆粒，如果不把它們?yōu)V除掉，就會(huì)堵塞泵口、柱頭上的過(guò)濾器，這樣就堵塞了流動(dòng)相的正常通道，使色譜柱的阻力增加，柱壓升高，柱效下降。

碰到這種情況時(shí)，要換用經(jīng)過(guò)濾的流動(dòng)相，并將堵塞的濾器拆下來(lái)浸泡在20%的硝酸水溶液中以超聲波清洗機(jī)清洗20分鐘，以除去濾片上的堵塞物。

流動(dòng)相在使用前須脫氣，以盡可能的除去溶解在流動(dòng)相中的氣體，否則，這些氣體會(huì)使柱填料的性能降，還能夠?qū)z測(cè)器的信號(hào)產(chǎn)生很大的干擾。脫氣有多種方法，如超聲脫氣、真空脫氣、氮?dú)饷摎獾?。真空脫氣法和氮?dú)饬髅摎夥ㄊ悄壳俺Ｓ玫拿摎夥?。水和甲醇混合后?huì)產(chǎn)生大量的氣泡，如果不脫氣就使用，氣泡就會(huì)進(jìn)入色譜柱和檢測(cè)器，并將影響分析工作的正常進(jìn)行。



3不使用緩沖鹽、沒(méi)有在正確的緩沖區(qū)間使用緩沖鹽

緩沖鹽的加入是用來(lái)控制和修正流動(dòng)相中PH值的改變的。

樣品基質(zhì)、空氣中的CO2、水中的雜質(zhì)都會(huì)造成流動(dòng)相PH值的改變，而PH值的改變會(huì)影響樣品的保留、峰形、峰面積參數(shù)。每個(gè)緩沖鹽都有一的緩沖范圍，在此范圍內(nèi)它提供了 佳的pH穩(wěn)定性。在這個(gè)范圍外，緩沖鹽在抵pH值變化方面是無(wú)效的。

所以要么在正確的范圍內(nèi)使用緩沖鹽，要么選擇一個(gè)緩沖范圍覆蓋所需pH值的緩沖鹽。



4向有機(jī)相中加入緩沖鹽

如果將水相的緩沖溶液加入到有機(jī)相中，會(huì)大大增加緩沖鹽析出的風(fēng)險(xiǎn)。

緩沖鹽的析出在初期可能并不顯，但會(huì)對(duì)儀器的各個(gè)部件都會(huì)產(chǎn)生一影響。



5梯度洗脫時(shí)直接用泵去混合流動(dòng)相并且流動(dòng)相比例從0 開(kāi)始

現(xiàn)在的液相色譜能夠的進(jìn)行在線(xiàn)脫氣和流動(dòng)相混合。但是將梯度洗脫比例從0 開(kāi)始，會(huì)有比較大的出現(xiàn)氣泡和沉淀的風(fēng)險(xiǎn)。



6沒(méi)有使用正確的pH值修飾酸或堿作為緩沖液

緩沖溶液的修飾酸或堿，只使用生成緩沖鹽的酸或堿。例如，磷酸鈉緩沖液只能用磷酸或氫氧化鈉調(diào)節(jié)。


7沒(méi)有在方法中說(shuō)明緩沖液的全信息

例如只在方法中寫(xiě)“稱(chēng)5克磷酸鈉溶入1000毫升水”。

緩沖鹽的類(lèi)型決定其pH緩沖范圍，而緩沖鹽中所需物質(zhì)的濃度決定了緩沖強(qiáng)度。例如：5g的無(wú)水磷酸鈉和5g的一水磷酸鈉具有不同的緩沖強(qiáng)度，會(huì)影響保留率。



8使用儀器時(shí)不調(diào)查之前使用的流動(dòng)相情況，直接用純有機(jī)溶劑沖系統(tǒng)

如果之前的方法在B通道使用緩沖溶液，而這次沒(méi)有經(jīng)過(guò)調(diào)查就直接在B通道使用了純的有機(jī)溶劑，那么就會(huì)造成該通道緩沖鹽析出、出現(xiàn)堵塞等風(fēng)險(xiǎn)。



9將溶劑瓶中的流動(dòng)相用干為止

溶劑瓶中的流動(dòng)相如果用干，未及時(shí)補(bǔ)充流動(dòng)相，泵將溶劑瓶中的流動(dòng)相吸干了，會(huì)導(dǎo)致儀器中出現(xiàn)氣泡等問(wèn)題。



10色譜柱變干

忘記蓋上色譜柱兩端的密封蓋或蓋子太松而使色譜柱變干。同樣，整個(gè)色譜柱干涸的情況不太容易發(fā)生，多半可能只是色譜柱兩端的幾個(gè)毫米變干了，因揮發(fā)掉所溶劑是色譜柱變干需要相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)間。即使色譜柱真的變干了，也不一就不可救了。可以嘗試一種全脫氣的、表面張力低的溶劑（如經(jīng)氦氣脫氣的甲醇）沖洗色譜柱以除去氣體。較低的表面張力助于浸潤(rùn)填料表面；已脫氣的溶劑應(yīng)該能夠溶解并除滯留在填料中的氣體。色譜柱大約需要（以1mL/min的流速）沖一個(gè)小時(shí)或多的時(shí)間被浸潤(rùn)，恢復(fù)到正常狀態(tài)。