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細(xì)胞均勻鋪板技巧

來源:上海鹿森生物工程有限公司   2019年07月26日 10:00  

1、一般96孔板,每孔是加100微升細(xì)胞懸液,從孔的左邊靠近底部加入,加完半邊板后,將未加的細(xì)胞懸液混一下再,繼續(xù)加剩余的半邊板子,都加完后蓋上蓋子,左手輕輕扶住板的左邊,右手輕輕敲擊板的右邊緣,注意把握力度,太強(qiáng)或次數(shù)太多會導(dǎo)致細(xì)胞集中成堆,將板順時(shí)針旋轉(zhuǎn)(逆時(shí)針效果不好),依次敲擊剩余三個(gè)邊,靜置約5分鐘,放入37度培養(yǎng)箱。

 

6孔板12孔板或24孔板,均采用將個(gè)孔加入少量無血清培養(yǎng)基,晃動(dòng)浸潤整個(gè)孔底,然后用移液槍吸至第二孔,同樣方法浸潤孔底,其它孔一次類推,這樣整個(gè)孔底都是濕潤的,細(xì)胞懸液會平鋪在整個(gè)孔底,加細(xì)胞懸液的時(shí)候可以避免加在中間中間細(xì)胞多,而加在周邊晃勻后周邊細(xì)胞多中間少的現(xiàn)象,細(xì)胞分散較均勻,注意加完細(xì)胞懸液后要放工作臺靜置一下。

 

2、細(xì)胞懸液加完后,將細(xì)胞培養(yǎng)板抬高,對著燈光,從底部往上看,看細(xì)胞有沒有抱團(tuán)。然后從底部敲擊,使之分散。

 

3、如果實(shí)驗(yàn)室有平板振蕩器的話,建議用這個(gè)儀器稍振蕩一下,效果不錯(cuò),就是振幅小,頻率高的那種。

 

4、細(xì)胞要盡量打散,大部分呈單個(gè)狀態(tài)。離心后,要充分懸??!還有轉(zhuǎn)移到六孔板后,是要晃得!晃的時(shí)候不要讓那個(gè)細(xì)胞液轉(zhuǎn)圈,不然細(xì)胞就全被帶到中間去了,就會不均勻!

 

5、一瓶細(xì)胞長滿后,正常處理,在培養(yǎng)瓶里吹勻,然后鋪6孔板,每孔2毫升,鋪完之后不用觀察直接用酒精棉擦拭,然后放到培養(yǎng)箱里,輕微的左三圈 右三圈 前三圈 后三圈。基本上24小時(shí)之后觀察 每孔的細(xì)胞都會很均勻。

 

6、計(jì)算好所需要的全部液體量和細(xì)胞量,混勻后,加到六孔板里,六孔板按橫8字型晃,顯微鏡下觀察,如果不均勻,按上述方法再晃。如果細(xì)胞未計(jì)數(shù)直接種的話,在種六孔板的過程中,隨時(shí)晃一下混勻用的瓶子,瓶子我通常是順時(shí)針或逆時(shí)針轉(zhuǎn)圈。

 

7、放在水平板面上先上下移動(dòng),再左右移動(dòng),每個(gè)方向5到6次,但關(guān)鍵的是搖完后直接放入培養(yǎng)箱中,不要再做過多的運(yùn)動(dòng),例如放到鏡下去看,否則很容易就又聚到中間去了。

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