細(xì)胞培養(yǎng)常見(jiàn)問(wèn)題和解決方法

細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是指在動(dòng)植物體外生長(zhǎng),并不再形成組織。培養(yǎng)物一般為細(xì)胞群,也可以是單個(gè)細(xì)胞,近年來(lái),其已經(jīng)成為很多生物制品的主要材料,并廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)病理研究,本文針對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)存在的一些常見(jiàn)問(wèn)題進(jìn)行分析研究并提出相應(yīng)防控措施,現(xiàn)總結(jié)如下：

問(wèn)題1：培養(yǎng)液pH值變化太快

可能原因：

(1)CO2張力不對(duì)

(2)培養(yǎng)瓶蓋擰得太緊

(3)NaHCO3緩沖系統(tǒng)緩沖力不足

(4)培養(yǎng)液中鹽濃度不正確

(5)細(xì)菌、酵母或真菌污染

建議解決方法：

(1)按培養(yǎng)液中NaHCO3濃度增加或減少培養(yǎng)箱內(nèi)CO2濃度，2.0g/L到3.7g/L濃度NaHCO3對(duì)應(yīng)CO2濃度為5%到10%。

(2)松開(kāi)瓶蓋1/4圈。

(3)改用不依賴(lài)CO2培養(yǎng)液。加HEPES緩沖液至10到25mM終濃度。

(4)在CO2培養(yǎng)環(huán)境中改用基于Earle′s鹽配制的培養(yǎng)液，在大氣培養(yǎng)環(huán)境中培養(yǎng)改用Hanks鹽配制的培養(yǎng)液。

(5)丟棄培養(yǎng)物，或用抗生素除菌。

問(wèn)題2：培養(yǎng)液出現(xiàn)沉淀，但pH值不變

可能原因：

(1)洗滌劑清洗后殘留有磷酸鹽，將培養(yǎng)基成分沉淀下來(lái)

(2)冰凍保存培養(yǎng)液

建議解決方法：

(1)用去離子水反復(fù)沖洗玻璃器皿，然后滅菌。

(2)將培養(yǎng)液加熱到37℃，搖動(dòng)使其溶解如沉淀仍然存在，丟棄培養(yǎng)液。

問(wèn)題3：培養(yǎng)液出現(xiàn)沉淀，同時(shí)pH發(fā)生變化

可能原因：

細(xì)菌或真菌污染

建議解決方法：

丟棄培養(yǎng)物，或用抗生素除菌。

琛藝細(xì)胞所需要的血清操作：

※血清是否需要做滅活處理？

    這取決于您的應(yīng)用。

    滅活過(guò)程中，會(huì)導(dǎo)致血清中某些成分被破壞，如氨基酸，維生素，生長(zhǎng)因子等。所以只有在您的實(shí)驗(yàn)對(duì)血清有特殊要求時(shí)，才會(huì)考慮對(duì)血清進(jìn)行滅活處理。如您的實(shí)驗(yàn)對(duì)血清中的某種組分敏感，需要去除該組分。好常見(jiàn)的情況是需要去除血清中的補(bǔ)體蛋白，因?yàn)檠a(bǔ)體在機(jī)體中參與細(xì)胞殺傷，巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞活化，肥大細(xì)胞和血小板組胺釋放，平滑肌收縮等過(guò)程，所以一般在免疫學(xué)相關(guān)研究中及肌細(xì)胞和干細(xì)胞的培養(yǎng)過(guò)程中需要對(duì)血清進(jìn)行滅活處理。

※如何進(jìn)行血清滅活處理？

    血清請(qǐng)先按上述“血清應(yīng)如何融解”中的操作步驟融化和混勻，熱滅活時(shí)請(qǐng)將血清置于56℃水浴30分鐘。為盡量減少熱滅活對(duì)血清品質(zhì)的影響，一次滅活的血清體積不宜過(guò)大。好好準(zhǔn)備同樣的容器裝相等體積的水（與血清相同溫度），滅活時(shí)將裝有血清和水的容器同時(shí)放入56℃水浴, 在裝水的容器中放置溫度計(jì)，加熱過(guò)程中不時(shí)輕輕旋轉(zhuǎn)混勻血清，當(dāng)溫度計(jì)顯示達(dá)到56℃左右，開(kāi)始計(jì)時(shí)。56 ℃水浴后，建議馬上轉(zhuǎn)移到冰上降溫。

※為什么需要對(duì)血清進(jìn)行g(shù)amma射線輻照？

    gamma 射線輻照的目的是滅活血清中的病毒，一般情況下，25-40kGy和30-45kGy是常用的輻射劑量。

※如何應(yīng)對(duì)血清的批間差？

    琛藝銷(xiāo)售的胎牛血清產(chǎn)品通過(guò)嚴(yán)格的質(zhì)控盡可能縮小批間差，但由于血清本身的特點(diǎn)和來(lái)源，無(wú)法*避免批間差?？蛻?hù)可以通過(guò)做預(yù)測(cè)試等方式，選擇可滿(mǎn)足要求的血清批次。