產(chǎn)品名稱：TE-13-LUC人食管癌細胞-熒光素酶標記培養(yǎng)步驟

·         產(chǎn)品編號：SKOV3/DDP

·         細胞數(shù)量： 1*10^6

·         細胞種屬： 人源

·         生長特性： 貼壁

·         培養(yǎng)基： DMEM-H

·         形態(tài)特征： 成纖維細胞樣

·         傳代方法： 1:3傳代,2-3天傳一代

·         培養(yǎng)條件： 胎牛血清至終濃度為10％。環(huán)境：空氣，95％;二氧化碳（CO2），5％；溫度，37℃

·         細胞描述： 親本L的亞克隆，是早建立的連續(xù)傳代細胞之一，L細胞源自100天的雄性C3H/An小鼠的皮下網(wǎng)眼狀空隙和脂肪組織。APRT+，HPRT+。

·         細胞凍存： 液氮凍存（凍存液基礎培養(yǎng)基+20%FBS+10%DMSO）

·         細胞運輸： 干冰運輸（2ml凍存管）或活細胞運輸（T25瓶）

TE-13-LUC人食管癌細胞-熒光素酶標記培養(yǎng)步驟

形態(tài)特性 上皮細胞樣　 
生長特性 貼壁生長 
特征特性 CHO-HCV-C細胞整合有丙型肝炎病毒的Core基因，能穩(wěn)定表達C蛋白，是HCV基礎研究的*摸型。它由武漢大學病毒學國家重點實驗室郭佳博士于2008年構建并保存。 
中國倉鼠卵巢細胞（亞系克?。?；CHO-HCV-C培養(yǎng)條件 DMEM/F12(1:1): Ham's F12/DME Medium (DME H-16/F-12 50% Mixture w/o HEPES, with NEAA Medium) 10%FBS　 
傳代方法 1:3傳代,2-3天傳一代 
傳代情況 C15 
凍存條件 基礎培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS　 
細胞周期分為細胞間期和細胞分裂期，細胞間期較長，而細胞分裂期較短。
細胞間期是為細胞分裂的準備時期，表現(xiàn)為細胞增大，營養(yǎng)物質增多。細胞分裂期則是一個細胞由兩個細胞分解為一個細胞的過程。
細胞是生命的基本單位，細胞的特殊性決定了個體的特殊性，因此，對細胞的深入研究是揭開生命奧秘、改造生命和征服疾病的關鍵。細胞生物學已經(jīng)成為當代生物科學中發(fā)展快的一門學科，是生物、農(nóng)學、醫(yī)學、畜牧、水產(chǎn)和許多生物相關專業(yè)的一門必修課程。
依據(jù)細胞種類和濃度，于無菌操作臺內(nèi)取 10 ml培養(yǎng)基加至 T25或 T75 flask中。取出已解凍之細胞懸浮液，緩緩加入T25 或T75 flask 內(nèi)之培養(yǎng)基， 混 合均勻，放入37 °C，5 % CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

注意事項

凍存細胞接收后的處理：

1.干冰運輸，收到細胞后立即轉入-80℃冰箱短暫中轉或直接復蘇；
2.收到細胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已經(jīng)*揮發(fā)、凍存管瓶蓋破裂脫落,請立即拍照后與我們聯(lián)系。

復蘇細胞接收后的處理：

1.收到細胞后，請首先檢查培養(yǎng)瓶是否破損或漏液，培養(yǎng)液是否混濁，如有漏液及培養(yǎng)液混濁情況請立即拍照把圖片發(fā)給我們。
2.75%酒精消毒瓶身后放培養(yǎng)箱中靜置4-6h后，在顯微鏡下確認細胞狀態(tài)并拍照100倍和200倍的照片，若有貼壁細胞脫落，可收集上清離心，將沉淀用新的培養(yǎng)基接種至新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中。
3.建議收到當天不要消化處理，如果細胞長滿90%，可選擇傳代處理。
4.如您收到細胞3天內(nèi)沒有反饋相關問題，出現(xiàn)的細胞問題將不提供免費重發(fā)服務。

細胞培養(yǎng)方法：

1. 細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
   ①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
   ②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
   ③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
   ④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
   ⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
   ⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
   2、細胞復蘇：
   ①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
   ②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
   3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
   ①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
   ②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；
   ③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
   ④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。