小鼠凋亡相關(guān)因子配體(FASL)ELISA試劑盒使用說明書

elisa試劑盒組成

注：標(biāo)準(zhǔn)品（S0-S5）濃度依次為：0、30、60、120、240、480 U/ml

試劑的準(zhǔn)備

 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

洗板方法

1.   手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。
2.   自動(dòng)洗板機(jī)：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

操作步驟

1.   從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.   設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；
3.   樣本孔先加待測(cè)樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加。
4.   除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.   棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。
6.   每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.   每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測(cè)定各孔的OD值。

結(jié)果判斷

 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：在Excel工作表中，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)OD值作縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線，按曲線方程計(jì)算各樣本濃度值。

試劑盒性能

1.  準(zhǔn)確性：標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值，大于等于0.9900。

2.  靈敏度：低檢測(cè)濃度小于1.0 U/ml。

3.  特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

4.  重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。

5.  貯藏：2-8℃，避光防潮保存。

6.  有效期：6個(gè)月

免責(zé)聲明

1.   試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或人體實(shí)驗(yàn)，否則所產(chǎn)生的一切后果，由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)，本公司概不負(fù)責(zé)。

2.   嚴(yán)格按照說明書操作，實(shí)驗(yàn)者違反說明書操作，后果由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)。

上海琛藝實(shí)業(yè)集技術(shù)，銷售為一體，需要ELISA試劑盒的，或者代做檢測(cè)的都可以聯(lián)系陳靜。。。。

?小鼠凋亡相關(guān)因子配體(FASL)ELISA試劑盒使用說明書

 能夠應(yīng)用ELISA 實(shí)驗(yàn)的樣本種類很多，有血清，血漿，細(xì)胞上清，細(xì)胞裂解液，尿液，關(guān)節(jié)滑液，腦脊液，肺泡灌洗液，各種組織的組織勻漿；采集和處理的方式都不相同。下面就列出了 收集的給類樣本的采集、處理和保存方式。方法大多出自文獻(xiàn)和試劑盒說明書，部分方法驗(yàn)證過，但有的方法并沒有實(shí)際操作過，所以，以下方法僅供參考。

 一、ELISA實(shí)驗(yàn)中血清的采集、處理和保存；

1、 真空采血針采集2ml新鮮血液，加入無菌試管中；

2、 采血后室溫靜置1小時(shí)；

3、 將采集血液用離心機(jī)4℃，2500rpm離心10min，，將離心好的勻漿留上清，棄下面沉淀。

4、 取上清。 分裝凍存?zhèn)溆茫?/span>

2-8℃下，可放置保存24-48小時(shí)；

-20℃下，可放置保存1個(gè)月；

-70℃下，可放置保存6個(gè)月；

5、 根據(jù)你的實(shí)驗(yàn)需要，取適量上清夜進(jìn)行各種ELISA測(cè)定。 

大部分ELISA檢測(cè)均以血清為標(biāo)本。血清標(biāo)本可按常規(guī)方法采集，應(yīng)注意避免溶血，紅細(xì)胞溶解時(shí)會(huì)釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì)，以HRP為標(biāo)記的 ELISA測(cè)定中，溶血標(biāo)本可能會(huì)增加非特異性顯色。此外還應(yīng)避免細(xì)菌污染，因?yàn)榫w中可能含有含有內(nèi)源性HRP，也會(huì)產(chǎn)生假陽性反應(yīng)。血清標(biāo)本宜在新鮮 時(shí)檢測(cè)。如在冰箱中保存過久，其中的可發(fā)生聚合，在間接法ELISA中可使本底加深。

 二、ELISA實(shí)驗(yàn)中血漿的采集、處理和保存；

1、 真空采血針采集2ml新鮮血液，加入無菌試管中；

2、 按1:9加入抗凝劑（EDTA、草酸鈉、肝素、枸櫞酸鈉），30分鐘內(nèi)于冰上分離血漿以減少血小板的污染；（也可以直接用抗凝管采集）；

3、 將采集血液用離心機(jī)4℃，2500rpm離心5min，，將離心好的勻漿留上清，棄下面沉淀。

4、 取上清。 分裝凍存?zhèn)溆茫?/span>

2-8℃下，可放置保存24-48小時(shí)；

-20℃下，可放置保存1個(gè)月；

-70℃下，可放置保存6個(gè)月；

5、 根據(jù)你的實(shí)驗(yàn)需要，取適量上清夜進(jìn)行各種ELISA測(cè)定。 請(qǐng)注意指標(biāo)說明書上對(duì)于抗凝血?jiǎng)┦欠裼刑厥庖螅ㄗh使用EDTA。血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外，其他成份均同等于血清。

注意事項(xiàng)：制備血漿標(biāo)本需借助于抗凝劑EDTA,抗凝不*的標(biāo)本因纖維蛋白原干擾而造成假陽性。

 三、ELISA 實(shí)驗(yàn)中尿液的采集、處理和保存；

1、 采集尿液樣本500ul，加入無菌試管中；

2、 將采集血液用離心機(jī)4℃，2500rpm離心10min，，將離心好的樣本留上清，棄下面沉淀。

3、 取上清。 分裝凍存?zhèn)溆茫?/span>

2-8℃下，可放置保存24-48小時(shí)；

-20℃下，可放置保存1個(gè)月；

-70℃下，可放置保存6個(gè)月；

4、 根據(jù)你的實(shí)驗(yàn)需要，取適量上清夜進(jìn)行各種ELISA測(cè)定。

 四、ELISA 實(shí)驗(yàn)中腦脊液的采集、處理和保存；

1、采集腦脊液樣本，加入無菌試管中；

2、將采集血液用離心機(jī)4℃，2500rpm離心10min，，將離心好的樣本留上清，棄下面沉淀。

3、取上清。 分裝凍存?zhèn)溆茫?/span>

2-8℃下，可放置保存24-48小時(shí)；

-20℃下，可放置保存1個(gè)月；

-70℃下，可放置保存6個(gè)月；

4、根據(jù)你的實(shí)驗(yàn)需要，取適量上清夜進(jìn)行各種ELISA測(cè)定。

 五、ELISA 實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞上清液的采集、處理和保存；

1、采集細(xì)胞培養(yǎng)上清液500ul，加入無菌試管中；

2、將采集血液用離心機(jī)4℃，2500rpm離心10min，，將離心好的勻漿留上清，棄下面沉淀。

3、取上清。 分裝凍存?zhèn)溆茫?/span>

2-8℃下，可放置保存24-48小時(shí)；

-20℃下，可放置保存1個(gè)月；

-70℃下，可放置保存6個(gè)月；

4、根據(jù)你的實(shí)驗(yàn)需要，取適量上清夜進(jìn)行各種ELISA測(cè)定。

 六、ELISA 實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞裂解液的采集、處理和保存；（需要測(cè)蛋白濃度）

1、 取細(xì)胞培養(yǎng)板或細(xì)胞懸液，用PBS（PH7.2-7.4）洗滌細(xì)胞培養(yǎng)板1-2次。

2、 通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑（裂解液），使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。

3、 將采集血液用離心機(jī)4℃，2500rpm離心20min，，將離心好的勻漿留上清，棄下面沉淀。

4、 取上清。 分裝凍存?zhèn)溆茫?/span>

2-8℃下，可放置保存24-48小時(shí)；

-20℃下，可放置保存1個(gè)月；

-70℃下，可放置保存6個(gè)月；

5、 根據(jù)你的實(shí)驗(yàn)需要，取適量上清夜進(jìn)行各種ELISA測(cè)定。