上海琛藝實(shí)業(yè)有限公司經(jīng)過數(shù)年的努力發(fā)展已迅速成為集產(chǎn)品研發(fā)、生產(chǎn)、經(jīng)營為一體的專業(yè)化生物工程公司。公司酶科品牌ELISA試劑盒研發(fā)的種屬涵蓋：人，大鼠，小鼠，豬，牛，羊，兔，植物，農(nóng)殘類，魚類等。具有完善的實(shí)驗(yàn)技術(shù)開發(fā)平臺，成熟的抗原、抗體研發(fā)系統(tǒng)，熟練掌握各種酶聯(lián)技術(shù)，結(jié)合公司的研發(fā)團(tuán)隊(duì)，可以有效的保證公司產(chǎn)品強(qiáng)的穩(wěn)定性和高的準(zhǔn)確性，同時又具有競爭力的價格。公司目前主要提供生化試劑、分子生物學(xué)試劑及試劑盒，各種抗體及免疫學(xué)試劑盒、實(shí)驗(yàn)耗材等多門類上萬種產(chǎn)品，產(chǎn)品涉及分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)等生命科學(xué)的各個領(lǐng)域。

中文名稱：人復(fù)制蛋白A(RPA-70)ELISA試劑盒使用說明書

英文名稱：human  Folic acid,FA ELISA kit

規(guī)格：96T/48T

品牌：chenyi

英文縮寫：CAMP

種屬：人ELISA試劑盒

檢測波長:450nm

所需樣本體積：50-100ul

適用范圍：僅供科研

庫存：現(xiàn)貨

保存及有效期:2-8℃,六個月

檢測目的:用于測定血清,血漿及相關(guān)液體等樣本。

例如適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦斧液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標(biāo)本。

琛藝供應(yīng)的種屬有:人、大鼠、小鼠、豚鼠、兔子、豬犬、牛羊、雞鴨、植物ELSA試劑盒等

上海琛藝實(shí)業(yè)長期代做人、大鼠、小鼠、兔子、豚鼠、豬、雞、犬、猴子、羊、牛等種屬elisa實(shí)驗(yàn)。

檢測原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被超氧化物歧化酶（SOD）抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的超氧化物歧化酶（SOD）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品濃度。

樣品收集、處理及保存方法

1.  血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2.  血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。

3.  細(xì)胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4.  組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。

5.  保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

自備物品

1. 酶標(biāo)儀（450nm）
2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒溫箱

操作注意事項(xiàng)

1.   試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶，這屬于正?，F(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再使用。
2.   實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。
3.   濃度為0的S0號標(biāo)準(zhǔn)品即可視為陰性對照或者空白；按照說明書操作時樣本已經(jīng)稀釋5倍，終結(jié)果乘以5才是樣本實(shí)際濃度。
4.   嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。
5.   所有液體組分使用前充分搖勻。

試劑盒組成

注：標(biāo)準(zhǔn)品（S0-S5）濃度依次為：0、20、40、80、160、320 U/mL

人復(fù)制蛋白A(RPA-70)ELISA試劑盒使用說明書

技術(shù)流程

試劑的準(zhǔn)備

 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

洗板方法

1.   手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。
2.   自動洗板機(jī)：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

操作步驟

1.   從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.   設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；
3.   樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加。
4.   除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.   棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。
6.   每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.   每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。

ELISA試劑盒的正確選購與運(yùn)用尤為重要。尤為是關(guān)于新手而言，掌握ELISA試劑盒的選購與運(yùn)用方面的知識更為重要。

一、ELISA試劑盒選購技巧

試劑盒的應(yīng)用種屬、檢測樣本的品種：除試劑盒特別闡明外，一般不同種屬不能通用。常見待測樣本品種有：血清和血漿（不同抗凝劑），細(xì)胞上清，和細(xì)胞裂解液，試劑盒中不同樣本的稀釋液不混用；

試劑盒的檢測規(guī)模：也便是標(biāo)曲規(guī)模，要留意待測樣本濃度是否落在標(biāo)曲規(guī)模內(nèi)，關(guān)于濃度很高的樣本，能夠*行預(yù)實(shí)驗(yàn)摸索到比較好的稀釋倍數(shù)后再大量測定樣本。 

二：ELISA試劑盒中的稀釋線性及回收率：

a、稀釋線性一般指樣本稀釋線性，是將樣本梯度稀釋下來，看各稀釋梯度濃度是否成線性；參閱樣本稀釋線性能夠挑選樣本的較佳稀釋倍數(shù)；

b、稀釋線性也有做加標(biāo)稀釋線性的情況，加標(biāo)稀釋線性是將規(guī)范品參加樣本中測定參加的規(guī)范品濃度測定是否準(zhǔn)確；同樣也是確定待測樣本稀釋倍數(shù)的參閱目標(biāo)。一般線性和回收率的規(guī)模在80%-120%比較適宜； 

三：ELISA試劑盒的其它目標(biāo)：

a、靈敏度：試劑盒能夠檢測到的樣本低濃度的才能，假如待檢目標(biāo)含量很低，需求挑選高靈敏度的ELISA試劑盒；

b、板間和板內(nèi)的變異系數(shù)（CV%）:反映板內(nèi)和不同板之間是否均勻，CV%一般小于10% 比較好。

c、試劑盒的有效期：試劑盒的有效期一般是半年至一年，樣本預(yù)備時刻需求考慮到試劑盒的有效期。

四、ELISA試劑盒運(yùn)用技巧

樣本的預(yù)備：盡量運(yùn)用新鮮樣本，不運(yùn)用有溶血，被細(xì)菌污染、標(biāo)本保存時刻過長和標(biāo)本凝固不全的樣本。ELISA檢測宜收集新鮮標(biāo)本，如不能當(dāng)即測定，5天之內(nèi)應(yīng)4℃保存，關(guān)于1周后檢測的樣本應(yīng)低溫凍存；做好分裝，長期凍存的樣本避免重復(fù)凍融。

仔細(xì)閱讀闡明書，了解整個流程，引薦畫出扼要步驟圖；提前預(yù)備試劑，比方常見20X洗滌液是濃縮液，需求用超純水提前稀釋預(yù)備好。一般的檢測抗體和酶標(biāo)二抗需求用對應(yīng)的稀釋液稀釋至工作濃度。不同批次的試劑不要混用，查看各組分的有效期。

預(yù)包被的酶標(biāo)板條和各試劑組份需求室溫平衡30 min以上，這樣做的意圖能使反響微孔內(nèi)的溫度較快地達(dá)到所需溫度，預(yù)防后續(xù)實(shí)驗(yàn)中因?yàn)榉跤郎囟然蚴菚r刻不夠充沛，而將一些弱陽性樣本不能檢出。

待測樣本加樣：待檢樣本過多時，建議分批操作；需求稀釋的樣本提前做好稀釋，留意選對適宜稀釋液；控制好加樣時刻，避免加樣費(fèi)時過長造成差錯；留意加樣視點(diǎn)，筆直參加孔底，不要接觸孔壁, 做到一份樣本一個移液頭，避免交叉污染。 

五：ELISA試劑盒溫育和洗板

溫育時刻和溫度一般依據(jù)試劑盒的闡明書進(jìn)行挑選。溫育時能夠選用水浴或許濕盒孵育,避免“邊緣效應(yīng)”。

①手工洗板時，決定時要筆直，避免交叉污染，用力不能過猛，避免抗原抗體復(fù)合物脫離；

②洗板機(jī)洗板時應(yīng)常常查看沖洗頭是否通暢。

顯色：市售ELISA試劑盒中，一般是以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物的顯色液，反響條件為37℃或室溫反響15～30 min。顯色反響需求避光。

讀數(shù)和數(shù)據(jù)剖析：終止后讀取結(jié)果盡量在15min內(nèi)完成，讀取OD值時酶標(biāo)儀需先預(yù)熱15～30 min再進(jìn)行。數(shù)據(jù)剖析一般用四參數(shù)和直線擬合法，挑選哪種擬合方式，能夠依據(jù)標(biāo)曲的相關(guān)系數(shù)（R2）來確定，R2一般需求大于0.99。

試劑盒性能

1.  準(zhǔn)確性：標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值，大于等于0.9900。

2.  靈敏度：低檢測濃度小于1.0 U/mL。

3.  特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

4.  重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。

5.  貯藏：2-8℃，避光防潮保存。

6.  有效期：6個月

免責(zé)聲明

1.   試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或人體實(shí)驗(yàn)，否則所產(chǎn)生的一切后果，由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)，本公司概不負(fù)責(zé)。

2.   嚴(yán)格按照說明書操作，實(shí)驗(yàn)者違反說明書操作，后果由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)。