四環(huán)素類藥物ELISA檢測試劑盒技術(shù)參數(shù)以及操作步驟

2 技術(shù)指標

2.1 試劑盒靈敏度：0.3ppb(ng/ml)

2.2 反應(yīng)模式：37℃，30min～30min～15min

2.3 檢測下限：

組織、肝臟、雞蛋………………1.8ppb

蜂蜜………………………………12ppb

尿樣………………………………3ppb

2.4 交叉反應(yīng)率：

四環(huán)素………………………………100%

金霉素………………………………340%

土霉素………………………………51%

強力霉素……………………………8.5%

 2.5 樣本回收率：

組織、肝臟、雞蛋…………85±20%

蜂蜜…………………………75±20%

尿樣…………………………80±20%

3 試劑盒組成

酶標板……………………………96孔

高濃度標準品溶液1瓶：（1ml/瓶）1.0ppm（高標準液有揮發(fā)性，需注意密封）

標準品溶液0ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb、24.3ppb（均為空瓶子，現(xiàn)配現(xiàn)用）。

酶標記物（紅蓋）…………………11ml

抗體工作液（藍蓋）………………5.5ml

底物液A（白蓋）……………………6ml

底物液B（黑蓋）……………………6ml

終止液（黃蓋）………………………6ml

20X濃縮洗滌液（白蓋）……………40ml

5X復(fù)溶液（黃蓋）…………………50ml

說明書………………………………1份

3酶聯(lián)免疫試驗步驟

    將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出，置于室溫平衡30min以上, 洗滌液冷藏時可能會有結(jié)晶需恢復(fù)到室溫以充分溶解，每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數(shù)量的微孔板及框架，將不用的微孔板放入自封袋，保存于2-8℃。

實驗開始前需配制：

1）用去離子水將20×濃縮洗滌液按20倍稀釋成工作洗滌液。

2）配制標準品應(yīng)用液；低濃度的標準品不穩(wěn)定，需現(xiàn)配現(xiàn)用。

在0ppb的瓶中加復(fù)溶液3ml，0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb的瓶中分別加復(fù)溶液2ml，24.3ppb的瓶中加復(fù)溶液2.93ml。

標準液6：取1.0ppm高濃度標準品溶液73ul加入裝有2.93ml 復(fù)溶液24.3ppb的瓶中，蓋緊，混勻，濃度即為24.3ppb。

標準液5：取1ml標準液6加入裝有2ml 復(fù)溶液8.1ppb的瓶中，蓋緊，混勻，濃度即為8.1ppb。

標準液4：取1ml標準液5加入裝有2ml 復(fù)溶液2.7ppb的瓶中，蓋緊，混勻，濃度即為2.7ppb。

標準液3：取1ml標準液4加入裝有2ml 復(fù)溶液0.9ppb的瓶中，蓋緊，混勻，濃度即為0.9ppb。

標準液2：取1ml標準液3加入裝有2ml 復(fù)溶液0.3ppb的瓶中，蓋緊，混勻，濃度即為0.3ppb。

標準液1：直接使用復(fù)溶液，濃度即為0ppb。

3.1 編    號：將樣本和標準品對應(yīng)微孔按序編號，每個樣本和標準品做2孔平行，并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。

3.2 加樣反應(yīng)：加標準品應(yīng)用液或樣本50µl/孔到各自的微孔中，然后加抗體工作液50µl/孔，輕輕振蕩5秒混勻，37℃避光反應(yīng)30分鐘。

3.3 洗    滌：將孔內(nèi)液體甩干，用工作洗滌液250µl/孔充分洗滌5次，每次間隔30秒，后用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。

3.4 加酶反應(yīng)：加酶標記物100µl/孔，37℃避光反應(yīng)30分鐘。

3.5 洗    滌：同上

3.6 顯    色：加底物液A 50µl/孔，再加底物液B 50µl/孔，輕輕振蕩5秒混勻，37℃避光顯色15分鐘。

3.7 終    止：加終止液50µl/孔，輕輕振蕩混勻，終止反應(yīng)。

3.8 測吸光值：用酶標儀于450nm處測定每孔吸光度值（建議用雙波長450/630nm）。測定應(yīng)在終止反應(yīng)后10分鐘內(nèi)完成。