人elisa試劑盒|elisa試劑盒可以用幾次

雙抗體夾心ELISA法定量測定人血清、血漿、組織勻漿、細(xì)胞裂解液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液和其他生物液體含量。

液體類標(biāo)本：
包括血清，血漿，尿液，胸腹水，腦脊液，細(xì)胞培養(yǎng)上清液等。
血清：
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分），仔細(xì)收集上清，如保存過程中如有沉淀，請?jiān)俅坞x心。
血漿：
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA，檸檬酸鈉或者肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，在離心20分鐘（2000-3000轉(zhuǎn)/分），仔細(xì)收集上清，如保存過程中有沉淀，請?jiān)俅坞x心。
尿液：
用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分），仔細(xì)收集上清，如保存過程中有沉淀，請?jiān)俅坞x心。
細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測分泌性的成份時(shí)，用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分），仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，當(dāng)細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右，通過反復(fù)凍融，使細(xì)胞破壞并釋放細(xì)胞內(nèi)的成份，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分），仔細(xì)收集上清，如保存過程中有沉淀，請?jiān)俅坞x心。
組織標(biāo)本：
切割標(biāo)本后，稱取重量，加入一定量的PBS（PH7.4），用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?，?biāo)本融化后仍保持2-8℃的溫度，加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分），仔細(xì)收集上清，分裝后留一份待檢測，其余冷凍備用。

人elisa試劑盒|elisa試劑盒可以用幾次相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究：

α烯醇化酶基因調(diào)節(jié)胃癌增殖及其機(jī)制研究
摘要：α-烯醇化酶基因(ENO1)是糖酵解過程中的一種代謝酶,催化2-磷酸甘油酸轉(zhuǎn)化磷酸烯醇式丙酮酸。ENO1在多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用,但是尚未有研究報(bào)道ENO1在胃癌中的作用,因此其在胃癌中的具體功能和發(fā)揮作用的分子機(jī)制有待深入研究。目的檢測ENO1基因在人胃癌組織及癌旁組織中的表達(dá)量,研究ENO1基因在胃癌發(fā)生發(fā)展中的重要生物學(xué)功能,并深入探討其參與胃癌發(fā)生發(fā)展的機(jī)制。方法1.首先通過免疫組織化學(xué)染色檢測ENO1在胃癌腫瘤組織及癌旁組織中的表達(dá)情況,并與TCGA數(shù)據(jù)庫中的結(jié)果進(jìn)行比較;應(yīng)用Kaplan-Meier法分析ENO1基因表達(dá)量與胃癌患者預(yù)后的相關(guān)性。2.應(yīng)用RNA干擾技術(shù)靶向沉默胃癌細(xì)胞株ENO1基因的表達(dá),通過CCK8實(shí)驗(yàn)、克隆形成實(shí)驗(yàn)、凋亡實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)及劃痕實(shí)驗(yàn)檢測ENO1對胃癌細(xì)胞株生物學(xué)功能的影響。3.應(yīng)用Affymetrix人類全基因表達(dá)譜芯片檢測ENO1基因干擾前后胃癌細(xì)胞株MGC-803中全基因組mRNA表達(dá)豐度。
試劑盒的組成： 
（1）結(jié)合物及標(biāo)本的稀釋液；
（2）洗滌液，在板式ELISA中，常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水；
（3）酶標(biāo)記的抗原或抗體（結(jié)合物）；
（4）酶的底物；
（5）陰性對照品和陽性對照品（定性測定中），elisa試劑盒參考標(biāo)準(zhǔn)品和控制血清（定量測定中）；
（6）已包被抗原或抗體的固相載體（免疫吸附劑）
用途：科研與實(shí)驗(yàn)試劑，不得用于臨床診斷。
檢測種屬：人、大小鼠、兔、羊、猴、豬、豚鼠ELISA檢測試劑盒等種屬。
標(biāo)本：血清、血漿、細(xì)胞上清液、尿液、體液、灌洗液、腦脊髓、心房水、胸房水、組織等。 

人elisa試劑盒解決辦法：
 血清是zui常用的人ELISA試劑盒標(biāo)本，血漿一般可視為與血清同等的標(biāo)本，標(biāo)本引起的假陽性和假陰性結(jié)果主要是干擾性物質(zhì)所致，分為內(nèi)源性物質(zhì)和外源性物質(zhì)兩種,本文主要為大家介紹內(nèi)源性物質(zhì)：
    內(nèi)源性物質(zhì)： 有人認(rèn)為大約40%的人血清標(biāo)本中含有非特異性干擾物質(zhì)，可以不同程度影響檢測結(jié)果。常見的干擾物質(zhì)有：類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、嗜異性抗體、嗜靶抗原自身抗體、醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠Ig (s)抗體、交叉反應(yīng)物質(zhì)和其它物質(zhì)等。
（1）類風(fēng)濕因子
人血清中IgM、IgG型類風(fēng)濕因子（RF）可以與人ELISA試劑盒系統(tǒng)中的捕獲抗體及酶標(biāo)記二抗的FC段直接結(jié)合，從而導(dǎo)致假陽性。
解決該情況的辦法是：
①用F(ab)2替代完整的IgG；
②標(biāo)本用聯(lián)有熱變性（63℃，10 min）IgG的固相吸附劑處理（將熱變性IgG加入到標(biāo)本稀釋液中同樣有效）；③檢測抗原時(shí)，可以用2-巰基乙醇等加入到標(biāo)本稀釋液中，使RF降解。
（2）補(bǔ)體 ELISA系統(tǒng)中固相一抗和標(biāo)記二抗過程中，人ELISA試劑盒抗體分子發(fā)生變構(gòu)，其FC段的補(bǔ)體C1q分子結(jié)合位點(diǎn)被暴露出來，使C1q 可以將二者連接起來，人ELISA試劑盒從而造成假陽性。解決的辦法是：①用EDTA稀釋標(biāo)本；②用53℃，10 min或56℃，30 min加熱血清使C1q滅活。
（3）嗜異性抗體 人類血清中含有能與嚙齒類動(dòng)物（如鼠等）Ig (s) 結(jié)合的天然嗜異性抗體，可將ELISA系統(tǒng)中一抗和二抗連接起來，也能造成假陽性。解決的辦法是：可在標(biāo)本稀釋液中加入過量的動(dòng)物Ig (s) ，但加入量不足或亞類不同時(shí)無效。
（4）嗜靶抗原的自身抗體 抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的自身抗體，有時(shí)能與靶抗原結(jié)合形成復(fù)合物，在人ELISA試劑盒方法中均可干擾抗原抗體測定結(jié)果。為避免以上情況出現(xiàn)，測定前需用理化方法將其解離后再測定。