雞傳染性支氣管炎病毒抗體檢測試劑盒實驗原理及操作步驟
雞傳染性支氣管炎病毒抗體檢測試劑盒實驗原理
本試劑盒系由預(yù)包被雞傳染性支氣管炎病毒重組N蛋白的酶標板、酶標記物及其他配套試劑組成,應(yīng)用酶聯(lián)免疫法(ELISA)原理檢測雞血清或血漿中雞傳染性支氣管炎病毒抗體。實驗時,在酶標板中加入對照血清和稀釋的待檢血清,經(jīng)溫育后,若樣品中含有雞傳染性支氣管炎病毒的抗體,則將與酶標板上抗原結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后;再加入酶標記物,與酶標板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合;再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶結(jié)合物,在孔中加TMB底物液,與酶反應(yīng)形成藍色產(chǎn)物,顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān);加入終止液終止反應(yīng)后,產(chǎn)物變?yōu)辄S色;用酶標儀在450nm波長測定各反應(yīng)孔中的吸光值,即可知樣品是否含有傳染性支氣管炎病毒抗體。
雞傳染性支氣管炎病毒抗體檢測試劑盒檢驗方法
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,恢復(fù)至室溫。
2.取所需用量酶標板條,設(shè)空白對照1孔、陰性/陽性對照各2孔,未用的板條盡快密封,2~8℃保存。
3.空白對照孔加樣品稀釋液100μl;陰、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照100μl;樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。
4.混勻,置37℃反應(yīng)30分鐘。
5.扣去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,重復(fù)洗滌5次,拍干。
6.每孔加酶標記物100μl(空白孔除外)。置37℃反應(yīng)30分鐘。
7.洗滌,同步驟5。
8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,混勻,37℃避光反應(yīng)10分鐘。
9.每孔加終止液50μl,混勻,用空白孔調(diào)零,于450nm(可用630nm作參比波長)測定各孔吸光值(A值)。
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