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TE354.T細胞|TE354.T人皮膚基底細胞癌 含STR

來源:上海琛藝實業(yè)有限公司   2019年10月22日 10:48  

上海琛藝實業(yè)有限公司經過數(shù)年的努力發(fā)展已迅速成為集產品研發(fā)、生產、經營為一體的專業(yè)化生物工程公司。公司新引進細胞上千株,其中人的已通過STR鑒定的有幾百株,歡迎各位選購。。。。。。

【中文名稱】TE354.T細胞|TE354.T人皮膚基底細胞癌 含STR

【背景資料】 見細胞說明書

【產品來源】 細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國內外大學建系

"公司提供貼壁、半貼壁、懸浮、半懸浮、貼壁與懸浮混合等細胞特性,一般細胞培養(yǎng)FBS

量是10%,如果出現(xiàn)細胞狀態(tài)不良情況,可以提高FBS量到15%, 細胞待細胞穩(wěn)定后,調回FBS量10%,對于初次實驗者,一般細胞培養(yǎng),都需要加入雙抗防止細胞污染,細胞匯合度達到90%,我們開始寄送,這樣可以保持細胞收到時,良好的細胞活力。

 

  • 售前
        上海琛藝專業(yè)為國內科研提供高品質細胞和服務,QC檢測合格后發(fā)貨保證細胞狀態(tài)良好,發(fā)貨前保證質量。
     
    二、售后
        收到細胞7天內出現(xiàn)狀態(tài)不佳等情況請及時反饋,會有技術同步指導操作協(xié)助解決,如仍未養(yǎng)活免費重發(fā)。建議及時保種,有備無患!
     
    三、細胞生長條件:

 

細胞系使用說明書

細胞名稱

TE354.T細胞|TE354.T人皮膚基底細胞癌 含STR

細胞背景

在PEG脅迫下,將原代培養(yǎng)的人臍靜脈細胞與抗硫鳥嘌呤的A549克隆株融合,構建了人臍靜脈細胞株, EA.hy926。融合子在HAT培養(yǎng)基上生長并以八因子相關抗原篩選。EA.hy926已經過100次以上的群體倍增(PDLs)。電鏡照片顯示Weibel-Palade小體的細胞質分布以及組織特異性的細胞器,分化的內皮細胞特性如血管生成,體內平衡/血栓形成,血壓及炎癥反應。

貨號

CY1002

種屬

細胞用途

僅供科研使用

生長特性

貼壁

培養(yǎng)

培養(yǎng)基:90%DMEM(高糖)+10%FBS

溫度:37℃     氣相:95%空氣,5%二氧化碳

細胞特性

 

1)  來源:體細胞融合細胞

2)  形態(tài):內皮細胞樣,貼壁生長

3)  含量:>1x106 個/mL

4)  污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

5)  規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

 

細胞培養(yǎng)步驟

1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:

1.      棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2.      加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3.      按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4.      收到細胞后傳代推薦將細胞懸液按1:2的比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,建議凍存一支備用,后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2到1:5的比例進行。

3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。

下面T25瓶為例;

1     細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,細胞變圓脫落后,加入2ml*培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。

2     1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。

3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

保存

凍存條件:90%*培養(yǎng)液+10%DMSO

(備注:建議使用本公司的冷凍液(H-W-100),用4度保存的冷凍液直接重懸細胞,不能預熱后使用。)

保存條件:液氮存儲

常見問題及解決方案

1.培養(yǎng)瓶有破裂,培養(yǎng)液有漏液:細胞極大可能會污染,所以我們會及時安排幫老師解決。

2.收到細胞后盡快更換為含 10%血清的新鮮培養(yǎng)基,如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶培養(yǎng)基,請在原瓶培養(yǎng)基中額外添加 10%的血清(原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時間長不宜超過 72 小時)

3.細胞漂?。号囵B(yǎng)瓶不開封,瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。1-2小時后觀察,如細胞大部分又貼回瓶底,表明細胞活力正常,剩余漂浮的細胞可以去掉,留8-10ml培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察,細胞生長至匯合度80%,進行消化傳代;如細胞還是不貼壁,將細胞離心收集轉到新培養(yǎng)瓶,原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng),中間注意觀察,我們的技術人員會一直跟蹤指導,直到問題解決。

 

二、 細胞培養(yǎng)及傳代
<1>細胞培養(yǎng)
① 細胞請于細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),大部分細胞是37℃,5% CO2,濕度100%環(huán)境下培養(yǎng)的。有極少部分細胞培養(yǎng)條件不一致,請仔細閱讀相應的細胞說明書,使用正確的培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件;
② 細胞于培養(yǎng)瓶或皿中培養(yǎng),加入適量說明書上標注的細胞相應*培養(yǎng)基(一般液面高度2-3mm即可)。
<2>細胞傳代(以下步驟適用于10cm皿)
① 細胞培養(yǎng)至密度達80%以上時即可傳代,先將細胞培養(yǎng)基取出3mL用15mL離心管裝好,其他培養(yǎng)基全部吸干舍棄;
② 培養(yǎng)皿加入2-3mL無菌PBS,輕輕晃動皿,使PBS浸洗到皿底所有部位,PBS吸干舍棄;
③ 加入1mL胰酶,輕輕晃動皿,使胰酶浸沒到皿底所有部位,將皿蓋好放入培養(yǎng)箱中消化;
④ 3min后,顯微鏡下觀察細胞,若大部分細胞不再貼壁,即可加入di一步收集的培養(yǎng)基混勻;若細胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至不貼壁為止;
⑤ 將細胞懸液均勻分成幾份,分別加入不同培養(yǎng)皿中,補加新培養(yǎng)基后放回培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
<3>相關問題
① 部分細胞在傳代后時,會有以下現(xiàn)象:細胞內會有黑色小點、細胞間隙有些顆粒物、培養(yǎng)基漂浮一些死細胞或者細胞長的極慢。出現(xiàn)以上現(xiàn)象時,可以咨詢本公司技術人員此現(xiàn)象是否正常及相關處理方式,不要頻繁換液,大多數(shù)細胞1周換液2-3次即可。
② 細胞碎片較多、背景較臟時,貼壁細胞用PBS漂洗兩次、懸浮細胞打散后低速離心(900rpm,3min)能有效改善。
③ 傳代比例建議1:2-1:3,長得比較快的細胞可以1:3,比較慢的按1:2傳代。傳代后,建議不要使用傳代前培養(yǎng)所使用的培養(yǎng)基,會有大量細胞碎片甚至導致細胞死亡的風險。
④ 細胞狀態(tài)不好或者生長極慢的時候,可以通過增加血清濃度調整細胞狀態(tài)及生長速度。
⑤ 請不要隨意更換培養(yǎng)基,因實驗需要,可以逐步馴化。
懸浮傳代:混勻細胞,收集細胞懸液900-1000rpm離心3min,棄上清。再加5ml PBS重懸細胞,再離心后,用*培養(yǎng)基重懸接種到新的培養(yǎng)皿。第二次PBS重懸是為了去除碎片,如果平時碎片比較少,傳代時可以省略PBS重懸的步驟;如果碎片很多,建議PBS多洗一次。

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