產(chǎn)品名稱:Hs888Lu人肺成纖維細胞培養(yǎng)說明書
規(guī)格:70%密度的25cm2培養(yǎng)瓶的細胞一瓶
包裝:內(nèi)層無菌自封袋;防壓泡沫盒;外層防壓保溫氣泡袋;說明書
細胞來源:ATCC、sciencell、ICLC
貨期:1-2周
運輸方式:快遞運輸
售后:收到細胞后12天,如發(fā)現(xiàn)細胞有質(zhì)量問題(如污染,死亡,快遞運輸?shù)仍颍r,應出具書面質(zhì)量問題報告并及時通知銷售人員,我們將盡快為您解決!
- Hs888Lu人肺成纖維細胞培養(yǎng)說明書
- 三、細胞生長條件:
培養(yǎng)條件:
| *培養(yǎng)基:90%RPMI-1640+10%胎牛血清+0.1ug/ml FU GIBCOFBS-10099-141或HYCLONEFBS-SH30084.03。 培養(yǎng)條件:37.0C carbon dioxide(CO2),5% | |
傳代方法:
| 收到細胞后,在倒置鏡下(是在4X物鏡)觀察整個細胞生長情況。 (一)如果細胞未長滿,用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內(nèi),嚴格無菌操作,低速離心,打開細胞培養(yǎng)瓶,吸出培養(yǎng)液(注意不要吸出細胞),換 10ml新鮮培養(yǎng)液后繼續(xù)培養(yǎng)。 (二)如果細胞已長滿,即可進行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下: 1. 低速離心,棄去培養(yǎng)液,用PBS(不含鈣,鎂離子)洗1-2次。 2. 按6-8ml/瓶補加*培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出一半,分到新的培養(yǎng)瓶中(補加*培養(yǎng)基至8到10ml)。如果沒有特別說明,收到細胞后的第yi次傳代一般是一傳二。 注:1、觀察細胞在低倍鏡(4或5X物鏡)下進行,否則不能準確判斷細胞的傳代密度??醇毎男螒B(tài)請在10X或20X物鏡下。 2、瓶中運輸培養(yǎng)基不能重復再用,請換用加雙抗的新培養(yǎng)基,細胞凍存后,培養(yǎng)基中可不加任何抗生素。 3、有些細胞貼壁不牢,如發(fā)現(xiàn)貼壁細胞有脫落,可離心吹打后接種到新瓶內(nèi)。 4、收到細胞后,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請及時與我們聯(lián)系。 | |
凍存方法: | 凍存液:90%胎牛血清,10%DMSO 儲存:液氮儲存 | |
做細胞實驗的同學看過來。
選擇上海琛藝生物細胞有3個理由:
1、細胞狀態(tài)好,形態(tài)佳,易成活,是市面上比較好養(yǎng)的細胞之一;
2、物流迅速,復蘇好后發(fā)貨,次日就能到;
3、使用我司推薦的進口品牌血清進行培養(yǎng)實驗,效果更佳。
三、 細胞凍存
<1>凍存操作
① 凍存液配方:建議使用92%FBS+8%DMSO,客戶自身實驗室所使用的凍存液也可以適用,血清濃度不低于30%,DMSO含量不高于12%即可。
② 收集細胞按照以上細胞傳代步驟操作至第④步后,將細胞懸液收集入15mL離心管,離心(1200rpm,3min);
③ 棄上清,加入配制好的凍存液,重懸細胞,懸液加入無菌凍存管中;
④ 將凍存管在4℃靜置10min,后將之正置于室溫下的厚壁有蓋泡沫盒中,蓋緊盒蓋,放入-80℃冰箱過夜,第二天放入液氮即可長期保存。
<2>相關(guān)問題
① 10cm皿的細胞長滿一般可以凍存2-3管,部分細胞長的比較慢,凍存的細胞密度要稍微大點,以防止復蘇后生長困難。
② 凍存液中含的DMSO請使用細胞級DMSO,同時濃度不要太高。部分細胞在10%DMSO條件下凍存會死亡,所以DMSO濃度5%-8%是比較推薦的濃度。
③ 細胞凍存及復蘇遵循慢凍快融的原則,即凍存時溫度不能急劇下降,應控制溫度緩慢下降。復蘇時應快速融化,融化后盡快加入培養(yǎng)基中。
④ 凍存時建議設置凍存檢測,即取0.2-0.3mL的凍存液重懸的細胞于一個凍存管中,與正常體積凍存的細胞共同凍存,至液氮后復蘇檢查凍存結(jié)果。凍檢合格前,留一部分細胞繼續(xù)培養(yǎng),以防萬一。
四、 細胞復蘇
<1>復蘇步驟
① 將凍存細胞從液氮中取出后迅速放入37℃溫水中搖晃融化,時間1min左右;
② 于1000rpm離心1min,棄凍存液,加入1mL新的*培養(yǎng)基重懸細胞;
③ 接種至新培養(yǎng)瓶或皿中,補加足量*培養(yǎng)基,放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
<2>相關(guān)問題
① 復蘇過程應迅速操作,時間不能太長。
② 復蘇過程中注意污染,小心操作。
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