產(chǎn)品名稱：NUTU-19-GFP大鼠卵巢癌細(xì)胞-綠色標(biāo)記 含STR鑒定

·         產(chǎn)品編號(hào)：

·         細(xì)胞數(shù)量：NUTU-19-GFP

·         細(xì)胞種屬： 大鼠

·         生長(zhǎng)特性： 貼壁

·         培養(yǎng)基： DMEM-H

·         形態(tài)特征： 成纖維細(xì)胞樣

·         傳代方法： 1:3傳代,2-3天傳一代

·         培養(yǎng)條件： 胎牛血清至終濃度為10％。環(huán)境：空氣，95％;二氧化碳（CO2），5％；溫度，37℃

·   

·         細(xì)胞凍存： 液氮凍存（凍存液基礎(chǔ)培養(yǎng)基+20%FBS+10%DMSO）

·         細(xì)胞運(yùn)輸： 干冰運(yùn)輸（2ml凍存管）或活細(xì)胞運(yùn)輸（T25瓶）

細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次。

細(xì)胞的凍存：目前，細(xì)胞凍存常用的技術(shù)是液氮冷凍保存法，主要采用加適量保護(hù)劑的緩慢冷凍法凍存細(xì)胞。主要操作步驟為：(１)選擇處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，在凍存前一天*換液。將多個(gè)培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞培養(yǎng)液去掉，用０.２５%胰蛋白酶消化。適時(shí)去掉胰蛋白酶，加入少量新培養(yǎng)液。用吸管吸取培養(yǎng)液反復(fù)吹打瓶壁上的細(xì)胞，使其成為均勻分散的細(xì)胞懸液。懸浮生產(chǎn)細(xì)胞則不要消化處理。然后將細(xì)胞收集于離心管中離心(１０００r/min，１０分鐘)。(２)去上清液，加入含２０%小牛血清的*培養(yǎng)基，于４℃預(yù)冷１５分鐘后，逐滴加入已無菌的DMSO或甘油，用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻，細(xì)胞濃度為３×１０(６)～１×１０(７)/mL之間。(３)將上述細(xì)胞分裝于安瓿或冷凍塑料管中，安瓿裝１～１.５mL在火焰噴燈上封口，封口處要*封閉，圓滑無勾。冷凍管要將蓋子蓋緊，并標(biāo)記好細(xì)胞名稱和凍存日期，同時(shí)作好登記(日期、細(xì)胞種類及代次、凍存支數(shù))。(４)將裝好細(xì)胞的安瓿或凍存管裝入沙布袋內(nèi);置于液氮容器頸口處存放過夜，次日轉(zhuǎn)入液氮中。采用控制降溫速度的方法也可采用下列步驟：先將安瓿置入４℃冰箱中２～３小時(shí)，再移至冰箱冷凍室內(nèi)３～４小時(shí)，再吊入液氮容器頸氣態(tài)部分存放２小時(shí)，*沉入液氮中。細(xì)胞凍存在液氮中可以長(zhǎng)期保存，但為妥善起見，凍存半年后，*取出一只安瓿細(xì)胞復(fù)蘇培養(yǎng)，觀察生長(zhǎng)情況，然后再繼續(xù)凍存。

公司細(xì)胞庫(kù)凍存并保種有2300多種各類細(xì)胞系。針對(duì)每種不同的細(xì)胞系，公司摸索并積累了大量細(xì)胞培養(yǎng)條件和優(yōu)化參數(shù)，為您的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航。細(xì)胞培養(yǎng)是生命科學(xué)研究中基礎(chǔ)、也是常用的實(shí)驗(yàn)手段。從凍存→復(fù)蘇→傳代→實(shí)驗(yàn)，在每一次細(xì)胞培養(yǎng)的過程中我們都是精心呵護(hù)，小心培養(yǎng)，心里都是默默承諾：我要護(hù)你一世周全！可是可是……無數(shù)次細(xì)胞都因污染而離我而去，投入的不只是我們貌美如花的青春，還有那一去不復(fù)返的經(jīng)費(fèi)！在細(xì)胞生物學(xué)，生物化學(xué)，免疫學(xué)，神經(jīng)生物學(xué)，病理學(xué)……只要涉及細(xì)胞的研究領(lǐng)域，都面臨著支原體污染的威脅。在眾多污染物中，也就屬支原體狡猾了，他善于隱藏自己，因?yàn)楸恢гw污染的細(xì)胞不會(huì)馬上死亡，但會(huì)改變細(xì)胞的新陳代謝，甚至?xí)淖兗?xì)胞的基因表達(dá)譜，我們就這樣被欺騙了無數(shù)次，誰讓我們就是個(gè)看“顏值”的花癡了?？墒俏覀兺ㄟ^幾百次的實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)中總結(jié)出來，當(dāng)你的細(xì)胞出現(xiàn)了這些癥狀時(shí)：生長(zhǎng)速率改變；活性減弱；形態(tài)改變；染色體畸變；轉(zhuǎn)染效率顯著降低；細(xì)胞復(fù)蘇后存活率降低……。那你就得千萬小心了，也許你的細(xì)胞已經(jīng)被支原體欺凌了！

培養(yǎng)細(xì)胞真的不難，關(guān)鍵幾點(diǎn)：１)所有的東西使用，如果你用的血清、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)基、胰酶什么的都是進(jìn)口的，真的很難相信你會(huì)把細(xì)胞養(yǎng)壞；２)動(dòng)作要快，胰酶消化，換液什么，細(xì)胞暴露在空氣中的時(shí)間越少越好。另外，要掌握好胰酶消化時(shí)間，所謂的細(xì)胞狀態(tài)差，很多時(shí)候是傳代的原因；３)有時(shí)間的話，需要細(xì)胞計(jì)數(shù)，傳相應(yīng)數(shù)目的細(xì)胞到培養(yǎng)皿中，可以大致清楚細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線，不會(huì)臨時(shí)要處理，手足無措；４)要做什么心里要非常清楚，合理安排時(shí)間，傳代細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)穿插進(jìn)行，可以節(jié)省很多時(shí)間，也不會(huì)耽誤別人的實(shí)驗(yàn)；５)個(gè)人的實(shí)驗(yàn)器具自己收一套，不要和別人混用，近換了什么新的東西稍微記一下，試劑一旦懷疑污染，馬上丟；６)傳代細(xì)胞不能進(jìn)去太多人，避免相互干擾。每天對(duì)待細(xì)胞比孝敬爹媽還用心，那真是捧在手里怕碎了，含在嘴里怕化了，看在眼里怕丟了，培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)有哪些經(jīng)驗(yàn)教訓(xùn)可以分享呢?１)嚴(yán)格無菌操作，多噴噴酒精，要是對(duì)滅菌的東西不放心，自己包自己送自己烘干；２)不要和別人共用試劑耗材，自己準(zhǔn)備一套；３)有可能的話在拿到新細(xì)胞的時(shí)候做好支原體衣原體檢測(cè)；４)水浴鍋很臟，生化培養(yǎng)箱要是得手動(dòng)加濕的話盤里的水也會(huì)很臟，勤換(滅菌水加進(jìn)去)；５)晚上離開的時(shí)候*給傳代細(xì)胞照紫外，超凈臺(tái)是用完就開；６)是同一時(shí)間就你一個(gè)人在用傳代細(xì)胞在養(yǎng)細(xì)胞。