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HT22細(xì)胞|HT22小鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞系

來源:上海琛藝實(shí)業(yè)有限公司   2019年10月28日 10:24  

產(chǎn)品名稱:HT22細(xì)胞|HT22小鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞系

包裝:內(nèi)層無菌自封袋;防壓泡沫盒;外層防壓保溫氣泡袋;說明書
細(xì)胞來源:ATCC、sciencell、ICLC
貨期:1-2周
運(yùn)輸方式:快遞運(yùn)輸
售后:收到細(xì)胞后12天,如發(fā)現(xiàn)細(xì)胞有質(zhì)量問題(如污染,死亡,快遞運(yùn)輸?shù)仍颍r(shí),應(yīng)出具書面質(zhì)量問題報(bào)告并及時(shí)通知銷售人員,我們將盡快為您解決!

  • HT22細(xì)胞|HT22小鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞系
  • 三、細(xì)胞生長條件:

 

  • 組成:

組份

數(shù)目

細(xì)胞

 1 T-25瓶

細(xì)胞說明書

一份

  • 細(xì)胞簡介:

生長特性:

貼壁生長

 

細(xì)胞來源:

從ATCC/中科院/協(xié)和醫(yī)院等地引進(jìn)

培養(yǎng)條件:

培養(yǎng)基:1640 +10%FBS(推薦德國BI 04-002-1A

優(yōu)等胎牛血清)

氣相:空氣95%,二氧化碳5%

溫度:37℃

培養(yǎng):

  • 貼壁細(xì)胞

1.用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒,將其平躺置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行2-3小時(shí)的緩沖,.然后置于無菌操作臺(tái),打開瓶口,將其中的培養(yǎng)液去掉,再往其中加入5-6mL新鮮培養(yǎng)基并置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),根據(jù)細(xì)胞生長狀況及培養(yǎng)基顏色變化對其進(jìn)行換液以及傳代;

2.待細(xì)胞長滿瓶底面積80%-90%,需要對其進(jìn)行傳代,di一次傳代比例為1:2。

3傳代步驟:將0.25%含EDTA胰酶置于37°預(yù)熱,倒掉培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,往培養(yǎng)瓶中加入1mlPBS,輕晃洗滌后棄去。往瓶中加1ml預(yù)熱好的胰酶,置于37°孵育消化(di一次消化需時(shí)常取出置于顯微鏡下觀察,以顯微鏡下細(xì)胞觸角回收變圓、輕拍瓶壁見細(xì)胞脫落為*消化時(shí)間,記錄*消化時(shí)間,以便于下次消化),消化好后加入1ml*培養(yǎng)基終止消化。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細(xì)胞,使之*脫落,然后收集細(xì)胞懸液,1200rpm離心3min,棄上清,加入*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,進(jìn)行傳代。

 

二、懸浮細(xì)胞

1.用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒,然后置于無菌操作臺(tái),打開瓶口,輕輕吹打后,將其中的細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到離心管中,然后1200rpm離心3min,去上清;

2.將離心好的細(xì)胞轉(zhuǎn)移至T-25瓶中,并加入5-6mL新鮮培養(yǎng)基,然后將其置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),根據(jù)細(xì)胞生長狀況及培養(yǎng)基顏色變化對其進(jìn)行換液(離心后去舊液,加入新鮮培養(yǎng)基);

3.顯微鏡觀察細(xì)胞數(shù)目比較多時(shí),對其進(jìn)行傳代,di一次傳代比例為1:2(離心后平均分成兩瓶培養(yǎng))。

 

細(xì)胞總數(shù):

1~3*106

傳代周期:

2-3天

傳代比例:

1:2~1:4

換液頻率:

2-3天

凍存液:

90%FBS+10%DMSO

三、 細(xì)胞凍存
<1>凍存操作
① 凍存液配方:建議使用92%FBS+8%DMSO,客戶自身實(shí)驗(yàn)室所使用的凍存液也可以適用,血清濃度不低于30%,DMSO含量不高于12%即可。
② 收集細(xì)胞按照以上細(xì)胞傳代步驟操作至第④步后,將細(xì)胞懸液收集入15mL離心管,離心(1200rpm,3min);
③ 棄上清,加入配制好的凍存液,重懸細(xì)胞,懸液加入無菌凍存管中;
④ 將凍存管在4℃靜置10min,后將之正置于室溫下的厚壁有蓋泡沫盒中,蓋緊盒蓋,放入-80℃冰箱過夜,第二天放入液氮即可長期保存。
<2>相關(guān)問題
① 10cm皿的細(xì)胞長滿一般可以凍存2-3管,部分細(xì)胞長的比較慢,凍存的細(xì)胞密度要稍微大點(diǎn),以防止復(fù)蘇后生長困難。
② 凍存液中含的DMSO請使用細(xì)胞級DMSO,同時(shí)濃度不要太高。部分細(xì)胞在10%DMSO條件下凍存會(huì)死亡,所以DMSO濃度5%-8%是比較推薦的濃度。
③ 細(xì)胞凍存及復(fù)蘇遵循慢凍快融的原則,即凍存時(shí)溫度不能急劇下降,應(yīng)控制溫度緩慢下降。復(fù)蘇時(shí)應(yīng)快速融化,融化后盡快加入培養(yǎng)基中。
④ 凍存時(shí)建議設(shè)置凍存檢測,即取0.2-0.3mL的凍存液重懸的細(xì)胞于一個(gè)凍存管中,與正常體積凍存的細(xì)胞共同凍存,至液氮后復(fù)蘇檢查凍存結(jié)果。凍檢合格前,留一部分細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng),以防萬一。
四、 細(xì)胞復(fù)蘇
<1>復(fù)蘇步驟
① 將凍存細(xì)胞從液氮中取出后迅速放入37℃溫水中搖晃融化,時(shí)間1min左右;
② 于1000rpm離心1min,棄凍存液,加入1mL新的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞;
③ 接種至新培養(yǎng)瓶或皿中,補(bǔ)加足量*培養(yǎng)基,放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
<2>相關(guān)問題
① 復(fù)蘇過程應(yīng)迅速操作,時(shí)間不能太長。
② 復(fù)蘇過程中注意污染,小心操作。

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