一、勻漿介質(zhì)
一般采用0.05 mol/L Tris-HCl, pH 7.4 磷酸鹽緩沖液(PBS),客戶可根據(jù)樣本及測(cè)定目標(biāo)的情況自行設(shè)定濃度,意圖是堅(jiān)持樣本的等滲環(huán)境。
二、安排勻漿的制備
1、取安排塊(0.2g~0.5g)可到5~10mg在冰冷的PBS中漂洗,濾紙拭干,稱重,放入5ml的勻漿管中。
2、按重量(g):體積(ml)=1:4的比例參加4倍體積的勻漿介質(zhì)于勻漿管中,冰水浴條件下,用眼科小剪盡快剪碎安排塊。
3、勻漿的方式:手藝勻漿,機(jī)器勻漿。
① 手藝勻漿:左手持勻漿管將下端刺進(jìn)盛有冰水混合物的器皿中,右手將搗桿垂直刺進(jìn)套管中,上下轉(zhuǎn)動(dòng)研磨數(shù)十次(6~8分鐘),充沛研碎,制成20%的勻漿液。
② 機(jī)器勻漿:用安排搗碎機(jī)10000~15000 轉(zhuǎn)/分 上下研磨制成20%安排勻漿,也可用內(nèi)切式安排勻漿機(jī)制備(勻漿時(shí)刻10秒/次,間隙30秒,接連3~5次,在冰水中進(jìn)行,可適當(dāng)延伸勻漿時(shí)刻),
4、將制備好的20%勻漿液用一般離心機(jī)或低溫低速離心機(jī)4000轉(zhuǎn)/分左右,離心10~15分鐘,取上清液進(jìn)行測(cè)定.
三、樣本保存:
植物安排樣本暫時(shí)不測(cè)定,可立即低溫凍存,溫度越低越好,中心如不重復(fù)凍融,-20℃以下可保存三個(gè)月,-70℃以下可保存六個(gè)月。 制備好的勻漿液建議不要凍存,當(dāng)天進(jìn)行測(cè)定,如放置時(shí)刻過(guò)長(zhǎng)相關(guān)酶活會(huì)有所下降,部分目標(biāo)4℃可寄存3~5天(如SOD要寄存2~3天,MDA可寄存3~5,總蛋白測(cè)定可存5~7天。
相關(guān)產(chǎn)品
免責(zé)聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來(lái)源:化工儀器網(wǎng)”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品,未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的,應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用,并注明“來(lái)源:化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者,本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來(lái)源(非化工儀器網(wǎng))的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對(duì)其真實(shí)性負(fù)責(zé),不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí),必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來(lái)源,并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問(wèn)題,請(qǐng)?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。