上海琛藝實(shí)業(yè)有限公司新增細(xì)胞庫(kù)，具有自己的研發(fā)細(xì)胞培養(yǎng)庫(kù)，上千株細(xì)胞具有STR鑒定，元旦大放送，*，同時(shí)還有好禮相送，具體歡迎咨詢。。

產(chǎn)品名稱：ID8細(xì)胞|ID8小鼠卵巢癌細(xì)胞 

·         細(xì)胞數(shù)量： 1*10^6

·         細(xì)胞種屬： 小鼠源

·         生長(zhǎng)特性： 貼壁

·         培養(yǎng)基： DMEM-H

·         形態(tài)特征： 成纖維細(xì)胞樣

·         傳代方法： 1:3傳代,2-3天傳一代

·         培養(yǎng)條件： 胎牛血清至終濃度為10％。環(huán)境：空氣，95％;二氧化碳（CO2），5％；溫度，37℃

·         細(xì)胞描述： 親本L的亞克隆，是早建立的連續(xù)傳代細(xì)胞之一，L細(xì)胞源自100天的雄性C3H/An小鼠的皮下網(wǎng)眼狀空隙和脂肪組織。APRT+，HPRT+。

·         細(xì)胞凍存： 液氮凍存（凍存液基礎(chǔ)培養(yǎng)基+20%FBS+10%DMSO）

·         細(xì)胞運(yùn)輸： 干冰運(yùn)輸（2ml凍存管）或活細(xì)胞運(yùn)輸（T25瓶）

ID8細(xì)胞|ID8小鼠卵巢癌細(xì)胞 

形態(tài)特性 上皮細(xì)胞樣　 
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng) 
特征特性 CHO-HCV-C細(xì)胞整合有丙型肝炎病毒的Core基因，能穩(wěn)定表達(dá)C蛋白，是HCV基礎(chǔ)研究的*摸型。它由武漢大學(xué)病毒學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室郭佳博士于2008年構(gòu)建并保存。 
中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞（亞系克隆）；CHO-HCV-C培養(yǎng)條件 DMEM/F12(1:1): Ham's F12/DME Medium (DME H-16/F-12 50% Mixture w/o HEPES, with NEAA Medium) 10%FBS　 
傳代方法 1:3傳代,2-3天傳一代 
傳代情況 C15 
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS　 
細(xì)胞周期分為細(xì)胞間期和細(xì)胞分裂期，細(xì)胞間期較長(zhǎng)，而細(xì)胞分裂期較短。
細(xì)胞間期是為細(xì)胞分裂的準(zhǔn)備時(shí)期，表現(xiàn)為細(xì)胞增大，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)增多。細(xì)胞分裂期則是一個(gè)細(xì)胞由兩個(gè)細(xì)胞分解為一個(gè)細(xì)胞的過程。
細(xì)胞是生命的基本單位，細(xì)胞的特殊性決定了個(gè)體的特殊性，因此，對(duì)細(xì)胞的深入研究是揭開生命奧秘、改造生命和征服疾病的關(guān)鍵。細(xì)胞生物學(xué)已經(jīng)成為當(dāng)代生物科學(xué)中發(fā)展快的一門學(xué)科，是生物、農(nóng)學(xué)、醫(yī)學(xué)、畜牧、水產(chǎn)和許多生物相關(guān)專業(yè)的一門必修課程。
依據(jù)細(xì)胞種類和濃度，于無菌操作臺(tái)內(nèi)取 10 ml培養(yǎng)基加至 T25或 T75 flask中。取出已解凍之細(xì)胞懸浮液，緩緩加入T25 或T75 flask 內(nèi)之培養(yǎng)基， 混 合均勻，放入37 °C，5 % CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

注意事項(xiàng)

凍存細(xì)胞接收后的處理：

1.干冰運(yùn)輸，收到細(xì)胞后立即轉(zhuǎn)入-80℃冰箱短暫中轉(zhuǎn)或直接復(fù)蘇；
2.收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已經(jīng)*揮發(fā)、凍存管瓶蓋破裂脫落,請(qǐng)立即拍照后與我們聯(lián)系。

復(fù)蘇細(xì)胞接收后的處理：

1.收到細(xì)胞后，請(qǐng)首先檢查培養(yǎng)瓶是否破損或漏液，培養(yǎng)液是否混濁，如有漏液及培養(yǎng)液混濁情況請(qǐng)立即拍照把圖片發(fā)給我們。
2.75%酒精消毒瓶身后放培養(yǎng)箱中靜置4-6h后，在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)并拍照100倍和200倍的照片，若有貼壁細(xì)胞脫落，可收集上清離心，將沉淀用新的培養(yǎng)基接種至新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中。
3.建議收到當(dāng)天不要消化處理，如果細(xì)胞長(zhǎng)滿90%，可選擇傳代處理。
4.如您收到細(xì)胞3天內(nèi)沒有反饋相關(guān)問題，出現(xiàn)的細(xì)胞問題將不提供免費(fèi)重發(fā)服務(wù)。

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1. 細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
   ①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
   ②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
   ③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
   ④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
   ⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
   ⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
   2、細(xì)胞復(fù)蘇：
   ①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
   ②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
   3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
   ①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
   ②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；
   ③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
   ④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。

1. 為什么培養(yǎng)的細(xì)胞要及時(shí)傳代？
    答：體外培養(yǎng)的細(xì)胞大多具有生長(zhǎng)接觸抑制的特性，也就是說當(dāng)一個(gè)細(xì)胞被其他細(xì)胞包圍的時(shí)候，它就會(huì)停止生長(zhǎng)，及時(shí)傳代后，細(xì)胞的生長(zhǎng)得以繼續(xù)。
2.培養(yǎng)液pH下降很快可能原因有哪些？其解決辦法是什么？
    答：通常細(xì)胞生長(zhǎng)得非?？鞎r(shí)，pH值通常下降得很快。此時(shí)可以及時(shí)傳代、提高傳代比例或降低血清量等方法進(jìn)行解決。此外，培養(yǎng)瓶蓋擰得太緊、NaHCO3 緩沖系統(tǒng)緩沖能力不夠、培養(yǎng)液中鹽濃度不正確、細(xì)菌、酵母或真菌污染等也能導(dǎo)致pH值通常下降得很快。
       (1)按培養(yǎng)液中NaHCO3 濃度增加或減少培養(yǎng)箱內(nèi)CO2 濃度，2.0g/L 到3.7g/L 濃度NaHCO3對(duì)應(yīng)CO2濃度為5％到10％。
       (2)改用不依賴CO2培養(yǎng)液。
       (3)松開瓶蓋1/4 圈。加HEPES 緩沖液至10 到25mM終濃度。
       (4)在CO2 培養(yǎng)環(huán)境中改用基于Earle′s 鹽配制的培養(yǎng)液，在大氣培養(yǎng)環(huán)境中培養(yǎng)改用Hanks 鹽配制的培養(yǎng)液。
       (5)如果是污染造成的則丟棄培養(yǎng)物或用抗生素除菌。
3.培養(yǎng)液pH對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響？
    答：由于大多數(shù)細(xì)胞適宜pH為7.2-7.4，偏離此范圍可能對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)將產(chǎn)生有害的影響。但各種細(xì)胞對(duì)pH的要求也不*相同，原代培養(yǎng)細(xì)胞一般對(duì)pH變動(dòng)耐受差，無限細(xì)胞系耐受力強(qiáng)。但總體來說，細(xì)胞耐酸性比耐堿性強(qiáng)一些。在配制培養(yǎng)用液時(shí)，需要注意一點(diǎn)：培新配的培養(yǎng)基在經(jīng)過0.10um或0.22um濾膜過濾時(shí)，溶液的pH還會(huì)向上浮動(dòng)0.2左右。
4.購(gòu)買之細(xì)胞冷凍管經(jīng)解凍后，為何會(huì)發(fā)生細(xì)胞數(shù)目太少之情形？
    答：研究人員在冷凍細(xì)胞之培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)細(xì)胞數(shù)目太少，大都是因?yàn)殡x心過程操作上的失誤，造成細(xì)胞的物理性損傷，以及細(xì)胞流失。建議細(xì)胞解凍后不要立刻離心，應(yīng)待細(xì)胞生長(zhǎng)隔夜后再更換培養(yǎng)基即可。但對(duì)于DMSO敏感的細(xì)胞，還是復(fù)蘇細(xì)胞時(shí)，用離心去除DMSO比較好。
5.購(gòu)買之細(xì)胞死亡或細(xì)胞存活率不佳可能原因？
    答：研究人員在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)存活率不佳，原因比較復(fù)雜，常見原因可歸納為：培養(yǎng)基使用錯(cuò)誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳；血清使用錯(cuò)誤或血清的品質(zhì)不佳；解凍過程錯(cuò)誤；冷凍細(xì)胞解凍后，加以洗滌細(xì)胞和離心；懸浮細(xì)胞誤認(rèn)為死細(xì)胞；培養(yǎng)溫度使用錯(cuò)誤；細(xì)胞置于–80 ℃太久等。建議嚴(yán)格參照ATCC或ECACC的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行細(xì)胞復(fù)蘇、凍存等工作。
6.支原體污染會(huì)對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)有何影響？
    答：支原體污染幾乎可影響所有細(xì)胞之生長(zhǎng)參數(shù)、代謝及研究之任一數(shù)據(jù)。故進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前，必須確認(rèn)細(xì)胞為mycoplasma-free，實(shí)驗(yàn)結(jié)果之?dāng)?shù)據(jù)方有意義。
7.冷凍保存細(xì)胞之方法？
    答：冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃(30－60 分鐘)→-20℃( 30 分鐘) → -80℃(16－18 小時(shí)或隔夜)→ 液氮罐長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3℃至–80 ℃以下， 再放入液氮中長(zhǎng)期儲(chǔ)存。注意：-20℃不可超過1 小時(shí)，以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
 
8.懸浮細(xì)胞應(yīng)如何繼代處理？
    答：一般僅需持續(xù)加入新鮮培養(yǎng)基于原培養(yǎng)瓶中，稀釋細(xì)胞濃度即可。若培養(yǎng)液太多時(shí)可分瓶取出一部份含細(xì)胞之培養(yǎng)液至另一新的培養(yǎng)瓶中，加入新鮮培養(yǎng)基稀釋至適當(dāng)濃度，重復(fù)前述步驟即可。
9.欲將一般動(dòng)物細(xì)胞離心下來，其離心速率應(yīng)為多少轉(zhuǎn)速？
    答：欲回收動(dòng)物細(xì)胞，其離心速率一般為300×g (約1,000rpm)，5 - 10 分鐘，過高之轉(zhuǎn)速過長(zhǎng)時(shí)間都將造成細(xì)胞死亡。合適的離心轉(zhuǎn)速是根據(jù)相對(duì)離心決定。 RCF=1.119×105×r×(rpm)2，其中 r為離心機(jī)轉(zhuǎn)軸中心與離心套管底部?jī)?nèi)壁的距離；rpm為離心機(jī)每分鐘的轉(zhuǎn)數(shù)；RCF(relative eentrifugal force)為相對(duì)離心力，以重力加速度g(980.66cm/s2)的倍數(shù)來表示表示單位。
10.培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)應(yīng)使用5%還是10%CO2，或者根本沒有影響？
    答：一般培養(yǎng)基中大都使用HCO3-/CO32-/H+ 作為pH 的緩沖系統(tǒng)， 而培養(yǎng)基中NaHCO3的含量將決定細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)應(yīng)使用的CO2濃度。當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3 含量為每公升3.7g時(shí)，細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)應(yīng)使用10% CO2；當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3為每公升1.5g時(shí)，則應(yīng)使用5%CO2培養(yǎng)細(xì)胞。
11.細(xì)胞冷凍管解凍培養(yǎng)時(shí)，是否應(yīng)馬上去除DMSO？
    答：除少數(shù)特別注明對(duì)DMSO敏感之細(xì)胞外，絕大部分細(xì)胞株(包括懸浮性細(xì)胞)，在解凍之后，應(yīng)直接放入含有10-15ml新鮮培養(yǎng)基之培養(yǎng)方瓶中，待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除DMSO即可，如此可避免大部分解凍后細(xì)胞無法生長(zhǎng)或貼附之問題。
12.冷凍管應(yīng)如何解凍？
    答：取出冷凍管后，須立即放入37℃水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1－2 分鐘內(nèi)大部分融化，特別注意，需殘留一小塊冰塊，就可拿到超凈工作臺(tái)操作細(xì)胞，用75％消毒凍存管，用新鮮培養(yǎng)基將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶。另外冷凍管由液氮桶中取出解凍時(shí)，必須注意安全，預(yù)防冷凍管之爆裂

13.如何用臺(tái)盼蘭計(jì)數(shù)活細(xì)胞？

    答：將樣品適當(dāng)稀釋后，用稀釋后的樣品和0.4％的臺(tái)盼蘭溶液按1:1混合后，用移液槍點(diǎn)樣到血球計(jì)數(shù)板，置于倒置顯微鏡下觀察、計(jì)數(shù)，其中藍(lán)色細(xì)胞是死細(xì)胞，因活細(xì)胞排斥臺(tái)盼蘭，不被染色。
14.細(xì)胞欲冷凍保存時(shí)，細(xì)胞冷凍管內(nèi)應(yīng)有多少細(xì)胞濃度？
    答：冷凍管內(nèi)細(xì)胞數(shù)目一般為1-8×106 cells/ml vial。
15.細(xì)胞冷凍培養(yǎng)基之成份為何？
    答：動(dòng)物細(xì)胞冷凍保存時(shí)常使用的冷凍培養(yǎng)基是含9 - 10 %DMSO (dimethyl sulfoxide) 和90 - 95 % 原來細(xì)胞生長(zhǎng)用之新鮮培養(yǎng)基均勻混合之。注意：由于DMSO 稀釋時(shí)會(huì)放出大量熱能，故不可將DMSO 直接加入細(xì)胞液中，必須使用前先行配制完成。
16.如何消除組織培養(yǎng)的污染？
    答：當(dāng)重要的培養(yǎng)細(xì)胞污染時(shí)，研究者可能試圖消除或控制污染。首先，確定污染物是細(xì)菌、真菌、支原體或酵母，把污染細(xì)胞與其它細(xì)胞系隔離開，用實(shí)驗(yàn)室消毒劑消毒培養(yǎng)器皿和超凈臺(tái)，檢查HEPA過濾器。
　　高濃度的抗生素和抗霉菌素可能對(duì)一些細(xì)胞系有毒性，因而，做劑量反應(yīng)實(shí)驗(yàn)確定抗生素和抗霉菌素產(chǎn)生毒性的劑量水平。這點(diǎn)在使用抗生素如兩性霉素B和抗霉菌素如泰樂菌素時(shí)尤其重要。下面是推薦的確定毒性水平和消除培養(yǎng)污染的實(shí)驗(yàn)步驟。
1)在無抗生素的培養(yǎng)基中消化、計(jì)數(shù)和稀釋細(xì)胞，稀釋到常規(guī)細(xì)胞傳代的濃度。
2)分散細(xì)胞懸液到多孔培養(yǎng)板中，或幾個(gè)小培養(yǎng)瓶中。在一個(gè)濃度梯度范圍內(nèi)，把選擇抗生素加入到每一個(gè)孔中。例如，兩性霉素B推薦下列濃度，0.25，0.50，1.0，2.0，4.0,8.0 mg/ml。
3)每天觀測(cè)細(xì)胞毒性指標(biāo)，如脫落，出現(xiàn)空泡，匯合度下降和變圓。
4)確定抗生素毒性水平后，使用低于毒性濃度2－3倍濃度的抗生素的培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞2－3代。
5)在無抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞一代。
6)重復(fù)步驟4。
7)在無抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)4－6代，確定污染是否以已被消除。
17.培養(yǎng)細(xì)胞出現(xiàn)死亡其可能的原因有什么？解決辦法有哪些？
    答：可能的原因有培養(yǎng)箱內(nèi)無CO2；培養(yǎng)箱內(nèi)溫度波動(dòng)太大；細(xì)胞凍存或復(fù)蘇過程中損傷；培養(yǎng)液滲透壓不正確；培養(yǎng)液種有毒代謝產(chǎn)物堆積等。解決辦法可以檢測(cè)培養(yǎng)箱內(nèi)CO2濃度，檢查培養(yǎng)箱內(nèi)溫度；取新的保存細(xì)胞種；檢測(cè)培養(yǎng)液滲透壓等；換入新鮮培養(yǎng)液等。
18.國(guó)內(nèi)可以買到細(xì)胞株的地方有哪些？
答：可以從國(guó)內(nèi)多家代理廠家買到ATCC或ECACC的細(xì)胞株
19.細(xì)胞的滲透壓耐受性是多少？
    答：細(xì)胞必須生活在等滲環(huán)境中，大多數(shù)培養(yǎng)細(xì)胞對(duì)滲透壓有一定耐受性。人血漿滲透壓290mOsm/kg, 可視為培養(yǎng)人體細(xì)胞的理想滲透壓。鼠細(xì)胞滲透壓在320mOsm/kg左右。對(duì)于大多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞，滲透壓在260－320mOsm/kg的范圍都適宜。