人特異性巨噬細胞武裝因子(SMAF)ELISA試劑盒標本收集:

1.血清：全血標本請于室溫放置2小時或4℃**后于1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，收集血液的試管應為一次性的無熱原，無內(nèi)毒素試管。

2.血漿：抗凝劑推薦使用EDTA，標本采集后30分鐘內(nèi)于 1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測。避免使用溶血，高血脂標本。

3. 其它生物標本：1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測

4. 標本應清澈透明，懸浮物應離心去除。

5.標本收集后若不及時檢測，請按一次使用量分裝，凍存于-20℃/-80℃電冰箱內(nèi)，避免反復凍融，1-6月內(nèi)檢測,4℃保存的應在1周內(nèi)進行檢測。

6. 如果您的樣本中檢測物濃度高于標準品zui高值，請根據(jù)實際情況，做適當倍數(shù)稀釋(建議先做預實驗，以確定稀釋倍數(shù))。

溫育是ELISA測定中影響測定成敗zui為關(guān)鍵的一個因素。ELISA作為一種固相免疫測定，抗原抗體的結(jié)合反應在固相上進行，要使液相中的抗原或抗體與固相上的特異抗體或抗原*結(jié)合，必須在一定的溫度條件下反應一定的時間。溫育所需時間與溫度成反比，即溫度越高，則所需時間相對較短。zui為常用的溫育溫度有37℃和室溫，其次是43℃和2～8℃。
溫育這一步是臨床ELISA測定中zui容易出現(xiàn)問題的步驟。通常目前國內(nèi)ELISA商品試劑盒的反應溫育時間為37℃ 30分鐘～1小時，elisa試劑盒則通常為37℃ 1～2小時才能有較*的結(jié)合，低于1小時，可能會影響測定下限。因此，關(guān)于溫育，在實際測定操作中一定要注意以下幾點：
(1)要保證在設(shè)定的溫度下有足夠的反應時間。一般來說，加完樣本和/或反應試劑后，將微孔板從室溫拿至水浴箱或溫箱中時，孔內(nèi)溫度從室溫升至37℃，需要一定的時間，尤其是在室溫比較低以及非水浴的狀態(tài)下，這段升溫時間可能還比較長，而在臨床實驗室中，很少有人注意這個問題，通常是將微孔板一放入溫箱即開始計時，這樣就很容易造成實際測定中溫育時間不夠，弱陽性樣本測不出來的問題。曾有一地處南方的血站同行提出了一個問題，就是在每一年的冬季總有那么一個多月的時間，在做HBsAg測定的室內(nèi)質(zhì)控中，測定由衛(wèi)生部臨床檢驗中心供應的1 ng/ml弱陽性樣本時，總是測不出來，不知原因為何？這可能就與南方冬天室內(nèi)溫度較低有關(guān)，此時微孔板轉(zhuǎn)入溫箱后37℃溫育時間不夠，以致弱陽性樣本測定為陰性。因此，為保證37℃下足夠的溫育時間，臨床實驗室可自行確定本實驗室不同季節(jié)(不同室溫下)微孔板從室溫拿至溫箱后需要多長時間孔內(nèi)溫度才能達到37℃，從而適當延長板條在溫箱中的放置時間。具體的做法是，用一小溫度計放置板孔反應溶液中測量觀察即可。

(2)溫育溫度的選擇。在人elisa試劑盒等elisa試劑盒的說明書中，指出溫育溫度可有兩種，例如，一種是37℃下1小時，另一種則為43℃下45分鐘。從免疫測定的抗原抗體反應的本質(zhì)來看，在較低的溫度下反應較長的時間zui為*。如2～8℃下反應24小時。較高的反應溫度，由于分子運動的加憐惜，反應時間縮短，這一點對分子含量較多的強陽性樣本的測定沒有問題，但對分子含量少的弱陽性樣本則有漏檢的可能。因此，我們建議在臨床ELISA測定中盡量使用較低溫育溫度較長反應時間的條件。

此elisa試劑盒可同時檢測天然或重組的，且與其他相關(guān)蛋白無相互反應。

特點：在經(jīng)過酶反應顯示的有色產(chǎn)物大多比較穩(wěn)定，因此有利于樣品的保存。對檢測結(jié)果即可用肉眼觀察，又可用顯微鏡觀察，也可以用分光光度計進行比色測定，還可用顯微鏡觀察。這是因為某些酶反應產(chǎn)物能使電子密度發(fā)生改變，從而引起被檢測物的顯示。

儀器要求：對免疫沒技術(shù)來說，不需要熒光顯微鏡，也不需要測定放射性的特殊儀器，所用儀器及試劑均屬一般性儀器與試劑，普通實驗室及生產(chǎn)應用單位均易購置。

elisa試劑盒實驗應注意的事項：

1.正式試驗時，應分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件，待檢樣品應作一式二份，以保證實驗結(jié)果的準確性。

2.在ELISA中，進行各項實驗條件的選擇是很重要的，其中包括:

(1)固相載體的選擇：目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進行篩選：用等量抗原包被，在同一實驗條件下進行反應，觀察其顯色反應是否均一性，據(jù)此判明其吸附性能是否良好。

（2）包被抗體(或抗原)的選擇：將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 18～24小時。

(3)酶標記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定。然后再固定其它條件或采取“方陣法"在正式實驗系統(tǒng)里準確地滴定其工作濃度。

(4)酶的底物及供氫體的選擇：對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應，而本身無色。有些供氫體有潛在的致癌作用，應注意防護。底物作用一段時間后，應加入強酸或強堿以終止反應。通常底物作用時間，以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制，尤其是H₂O₂在臨用前加入。