Caco2細(xì)胞|人結(jié)腸癌細(xì)胞Caco2 含STR鑒定

Caco-2/人結(jié)腸癌細(xì)胞的介紹

背景及概述：

結(jié)腸腺癌是發(fā)生于結(jié)腸粘膜上皮的惡性腫瘤。癌細(xì)胞形成大小不等、形狀不一、排列紊亂的腺樣結(jié)構(gòu)。癌細(xì)胞常為多層排列，核大小不一，核分裂像多見(jiàn)。。Caco-2/人結(jié)腸腺癌細(xì)胞分離自直腸原位癌。當(dāng)長(zhǎng)到滿時(shí)，細(xì)胞表現(xiàn)出特征性的腸上皮細(xì)胞分化。Caco-2/人結(jié)腸腺癌細(xì)胞表達(dá)維甲酸結(jié)合蛋白I和維甲酸結(jié)合蛋白II，并呈角質(zhì)蛋白陽(yáng)性。培養(yǎng)基為IMDM培養(yǎng)基，添加2mML-谷氨酰胺和Earle'sBSS，含1.5g/L碳酸氫鈉，0.1mM非必需氨基酸，和1.0mM丙酮酸鈉，80%；FBS，20%。有實(shí)驗(yàn)研究中藥化學(xué)成分鹽酸黃連堿(coptisinechloride，COP)和小檗紅堿(berberrubine，BRB)在人腸的吸收。

Caco-2/人結(jié)腸腺癌細(xì)胞主要用于科學(xué)研究，有實(shí)驗(yàn)采用Caco-2/人結(jié)腸腺癌細(xì)胞單層模型研究COP和BRB由絨毛面(AP側(cè))到基底面(BL側(cè))、BL側(cè)到AP側(cè)兩個(gè)方向的轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程。結(jié)果顯示COP和BRB由AP側(cè)到BL側(cè)的表觀滲透系數(shù)(Papp)分別為(1.103±0.162)×10-5，(1.309±0.102)×10-5cm.s-1；由BL側(cè)到AP側(cè)的Papp分別為(0.300±0.041)×10-5，(1.955±0.055)×10-5cm.s-1，與在Caco-2/人結(jié)腸腺癌細(xì)胞單層模型上呈良好吸收的陽(yáng)性對(duì)照藥普萘洛爾[(2.23±0.10)×10-5cm.s-1]的基本一致。因此COP和BRB可以通過(guò)小腸上皮細(xì)胞被動(dòng)吸收進(jìn)入體內(nèi)，屬于良好吸收的藥物，在兩者的吸收轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程中，油/水分配系數(shù)起著關(guān)鍵性的作用；BRB在Caco-2/人結(jié)腸腺癌細(xì)胞單層模型中的轉(zhuǎn)運(yùn)可能存在外流機(jī)制。

而本公司培養(yǎng)的細(xì)胞采用胰蛋白酶-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法，并通過(guò)上皮細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10^5cells/瓶；細(xì)胞經(jīng)PCK/TG免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

人結(jié)腸癌細(xì)胞Caco2參數(shù)規(guī)格

 1） 含量：>1x106 個(gè)/mL

 2） 污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性

 3） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式：

 （1）干冰運(yùn)輸，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復(fù)蘇；

 （2）存活細(xì)胞，收到后應(yīng)繼續(xù)生長(zhǎng)，傳代達(dá)到細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，再進(jìn)行凍存。具體操作見(jiàn)細(xì)胞培養(yǎng)步驟。

 （3）收到細(xì)胞后請(qǐng)拍照，3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染，請(qǐng)及時(shí)拍照與我們聯(lián)系。

 用途：僅供科研使用。

Caco2細(xì)胞|人結(jié)腸癌細(xì)胞Caco2 含STR鑒定

 1） 收到細(xì)胞后，請(qǐng)檢查是否漏液，如果漏液，請(qǐng)拍照片發(fā)給我們。

 2） 請(qǐng)先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。

 3） 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加6ml新的*培養(yǎng)基。

 4） 如果細(xì)胞長(zhǎng)滿（90%以上）請(qǐng)及時(shí)進(jìn)行細(xì)胞傳代。

 5） 接到細(xì)胞次日，請(qǐng)檢查細(xì)胞是否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請(qǐng)及時(shí)與我們?nèi)〉寐?lián)系。

  細(xì)胞培養(yǎng)步驟

 一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

 1） 準(zhǔn)備L-15培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。

 2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，100%。 溫度：37攝氏度。

 3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

 二． 細(xì)胞處理：

 1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入250px皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

 2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

 對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

 1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

 2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

 3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

 4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

 注：次傳代推薦傳代比例為1:2，以后傳代比例可根據(jù)客戶需要自己決定。

 3） 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。

 下面T25瓶為例；

 1．細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入2ml*培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至*終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。

 3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

人結(jié)腸癌細(xì)胞Caco2 細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)

 1.收到Caco2細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。

 2.收到細(xì)胞先不開(kāi)瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)（視細(xì)胞密度而定）穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收細(xì)胞時(shí)就整體外觀拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài)，100*，200*各一張），觀察記錄細(xì)胞在運(yùn)輸過(guò)程中是否有污染情況。作為我方進(jìn)行銷售依據(jù)。

 3.由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運(yùn)輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊?，故本公司只保證客戶收到細(xì)胞后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài)，故客戶需要售后時(shí)需出示收到細(xì)胞的時(shí)間證明及客戶提供收貨時(shí)間和發(fā)現(xiàn)問(wèn)題后客服人員溝通的時(shí)間證明，期間間隔時(shí)間不能大于7天。

 4.所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

合作單位

經(jīng)過(guò)多年的不懈努力，我公司合作的單位有：復(fù)旦大學(xué)華山醫(yī)院，中山醫(yī)院，山西中醫(yī)藥大學(xué)：貴州達(dá)靈藥業(yè)，武漢巴菲爾生物，杭州啟新生物，容大生物，鄭州大學(xué)，東南大學(xué)，成都華健未來(lái)生物，同濟(jì)大學(xué)，廣州中醫(yī)藥大學(xué)，河南大學(xué)，上海大學(xué)，柳岸生物技術(shù)有限公司，中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院等等。。。。。。

上海琛藝實(shí)業(yè)有限公司是一批由美國(guó)留學(xué)歸來(lái)的致力于服務(wù)中國(guó)生物領(lǐng)域的青年創(chuàng)辦的一家新型公司。公司自創(chuàng)辦以來(lái)，以的產(chǎn)品、快捷的速度和完善的售后服務(wù)，贏得生物界老師的厚愛(ài)，您選擇琛藝的理由： 產(chǎn)品齊全：囊括實(shí)驗(yàn)室儀器、設(shè)備、實(shí)驗(yàn)室耗材、免疫生物學(xué)試劑、動(dòng)物生物學(xué)試劑、植物生物學(xué)試劑、微生物學(xué)試劑、細(xì)胞生物學(xué)試劑、遺傳學(xué)生物試劑、生物化學(xué)試劑、分子生物學(xué)試劑。 品牌齊全：囊括國(guó)內(nèi)外100多個(gè)。 方便、快捷，訂貨周期短，選擇服務(wù)質(zhì)量好的快遞，全稱跟蹤，及時(shí)到達(dá)您的手中。上海琛藝努力打造生物領(lǐng)域內(nèi)的京東商城。 平價(jià)：同等質(zhì)量的產(chǎn)品，我們這里價(jià)格實(shí)惠，為您節(jié)省每一分錢(qián)。 的售后服務(wù)：實(shí)驗(yàn)過(guò)程，我們有技術(shù)全程跟蹤指導(dǎo)，若有問(wèn)題，我們di一時(shí)間為您處理，保證您售后無(wú)憂。 多姿多彩的技術(shù)服務(wù)：免疫學(xué)技術(shù)服務(wù)、Western Blotting技術(shù)服務(wù)、實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RealTime PCR)技術(shù)服務(wù)、病理學(xué)檢測(cè)技術(shù)服務(wù)等。 總之，上海琛藝是您值得信賴的地方：誠(chéng)實(shí)正直，以客戶的切身利益為出發(fā)點(diǎn)，關(guān)注客戶，協(xié)助客戶一起成長(zhǎng)！