感受態(tài)細(xì)胞Stbl2 規(guī)格10×100ul*
感受態(tài)細(xì)胞Stbl2 規(guī)格10×100ul*
貨號(hào) | 規(guī)格 | 儲(chǔ)藏 |
PD6234-10×100μl | 10×100μl | -80℃保存 |
PD6234-20×100μl | 20×100μl | -80℃保存 |
保 存:-80℃保存,運(yùn)輸為干冰包裝。自收貨之日起液氮保存至少一年,-80℃保存至少 6 個(gè)月。
產(chǎn)品簡介:
本公司生產(chǎn)的Stbl2 感受態(tài)細(xì)胞是采用大腸桿菌DH5α菌株經(jīng)特殊工藝制備得到,具有無需繁瑣的冰浴、熱擊程序,簡單快速的進(jìn)行質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)化。使用pUC19 質(zhì)粒檢測,轉(zhuǎn)化效率zui高可達(dá) 2×107cfu/μg,-80℃保存 3-5 個(gè)月轉(zhuǎn)化效率不發(fā)生改變。
基因型: supE44△lacU169(φ80 lacZ△M15)hsdR17 recA1 end A1 gyrA96 thi-1 relA1
特 點(diǎn): 一種用于鋪制與培養(yǎng)質(zhì)粒平板和粘粒平板的重組缺陷的抑制型菌株。其 φ80 lacZ△M15 基因的產(chǎn)物可與 pUC 載體編碼的 β-半乳糖苷酶氨基端實(shí)現(xiàn) β 互補(bǔ),可用于藍(lán)白斑篩選。
操作方法:(以下操作均按無菌條件的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行)
- 將感受態(tài)細(xì)胞置于冰上融化,以下實(shí)驗(yàn)以 100 μl 感受態(tài)細(xì)胞為例。
- 向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入需轉(zhuǎn)化的目的 DNA,注意目的 DNA 的體積不要超過感受態(tài)細(xì)胞懸液體積的十分之一。
- 室溫靜置5-10min。
- 向離心管中加入 900μl 無菌無抗的 SOC(本試劑盒提供) 或 LB 培養(yǎng)基,37℃ 180 rpm 振蕩培養(yǎng) 30分鐘到1小時(shí)。目的是使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達(dá),使菌體復(fù)蘇。
- 取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞涂布含相應(yīng)抗生素的 SOC 或 LB 平板,37℃倒置培養(yǎng) 12-16小時(shí)或6-8小時(shí)培養(yǎng)。涂布用量可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)來調(diào)整,如轉(zhuǎn)化的 DNA 總量較多,可取200μl 左右的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂板;反之,如轉(zhuǎn)化的 DNA 總量較少,可4℃,2500g離心5min后,棄去上清約700μl,用剩余約200-300μl 的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂板。過多菌液可以抑制細(xì)菌生長。如果預(yù)計(jì)的克隆較少,可通過離心后吸除部分培養(yǎng)液,懸浮菌體后將其涂布于一個(gè)平板中。
注意事項(xiàng):
- 感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存在-80℃,不可反復(fù)凍融,否則其轉(zhuǎn)化效率將會(huì)降低。
- 實(shí)驗(yàn)過程中應(yīng)嚴(yán)格無菌操作,防止其它 DNA 或雜菌的污染,避免為以后的篩選、鑒定帶來影響。
- 轉(zhuǎn)化時(shí),轉(zhuǎn)化效率與外源 DNA 的濃度在一定范圍內(nèi)成正比,但當(dāng)加入的外源 DNA 量過多或體積過大反而會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。轉(zhuǎn)化時(shí) DNA 體積要小于感受態(tài)細(xì)胞體積的十分之一。
- 轉(zhuǎn)化率的計(jì)算:轉(zhuǎn)化率=產(chǎn)生菌落的總數(shù)/鋪板 DNA 總量。
- 為防止轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)不成功,可以保留部分連接產(chǎn)物,以重新轉(zhuǎn)化,將損失降到zui低。
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