TG1 Electroporation-Competent Cell

TG1非電轉(zhuǎn)感受態(tài)細胞-大腸桿菌類-TG1 電擊感受態(tài)細胞基因組：
[F?  traD36 proAB lacIqZ M15] supE thi-1    (lac-proAB)    (mcrB-hsdSM)5(r –m –)
K    K
TG1 非電擊感受態(tài)細胞簡要說明：
TG1 來源于 E.coliK-12 菌株，是目前生 長 速度快的克隆用大腸桿菌菌株，在平板上 37℃，7 h 可見克隆。主要的噬菌體展示用菌株，同時也 可用 于普通質(zhì)粒的構(gòu)建，lacIqZ M15 的存在使其可以用于藍白斑篩選等實驗；但不含核酸酶 endA1 突 變，體 內(nèi)核酸酶含量較高，提取質(zhì)粒時推薦使用質(zhì)粒提取試劑盒中去蛋白液以去除菌體內(nèi)大量的核酸酶。
-CMbio-TG1 非電擊感受態(tài)細胞適用于噬菌體展示文庫的構(gòu)建，經(jīng)特殊工藝制作，pUC19 質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化 效率>0.5× 1010 cfu/μg DNA。-CMbio-
TG1 非電擊感受態(tài)細胞操作說明：
1. 0.1 cm 從儲存液中拿出倒置于干凈的吸水紙上 5 分鐘，待其瀝干水分，正置 5   分鐘，使乙

醇充分揮發(fā)，待乙醇揮發(fā)干凈立即插入冰中，壓實冰面，電極杯頂離冰面 0.5 cm 以方便蓋上杯蓋，冰中 靜 置 5 分鐘充分降溫。-CMbio-
2. 取-80℃保存的 TG1 電擊感受態(tài)細胞插入冰中 5 分鐘，待其融化，加入目的 DNA (質(zhì)粒或連接產(chǎn)物) 并用手 EP 管底輕輕混勻，避免產(chǎn)生氣泡，立即插入冰中。-CMbio-
A.  測定轉(zhuǎn)化效率使用  1 μl 10 pg/μl 的對照質(zhì)粒 pUC19；-CMbio-
B. 對于連接產(chǎn)物，請用乙醇沉淀 DNA 后加入適量 TE 緩沖液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重懸， DNA 濃度不超過 100 ng/μl，體積不超過 5 μl/50 μl    感受態(tài)。-CMbio-
3. 用 200 μl 槍頭(用刀切除 0.5cm  槍尖)將感受態(tài)-DNA   混合物快速移到電擊杯中，避免產(chǎn)生氣泡，蓋上杯蓋。

4. 啟動電轉(zhuǎn)儀，設(shè)置參數(shù)：C=25 μF，PC=200 Ω，V=1.8 kV (此為 BioRad 電轉(zhuǎn)儀推薦參數(shù)，也可按所用 電轉(zhuǎn)儀推薦的參數(shù)操作），將電擊杯快速放入電轉(zhuǎn)槽中，電擊完成快速插入冰中。-CMbio-
5. 2 分鐘后從冰中取出電擊杯，放室溫，加入 1ml 不含抗生素的無菌 S.O.C. 培養(yǎng)基（室溫），用 1ml 槍 吹吸電擊杯底部數(shù)次混勻后，轉(zhuǎn)移到 50 ml 離心管（BD Falcon 50 ml 錐形離心管等），向離心管中 補 加 S.O.C. 培養(yǎng)基至  10 ml。傾斜 45 度放入搖床，37℃，225 rpm 復(fù)蘇 60    分鐘。-CMbio-
6. 5000 rpm 離心一分鐘收菌，重懸后取 100-200 μl 涂布到含相應(yīng)抗生素的 S.O.C 平板上（因菌量較大， 若全部涂板請選用直徑 15cm 培養(yǎng)皿 2-5 個）。將平板倒置放于 37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng) 13-17     小時。

更多感受態(tài)細胞的應(yīng)用如下：