人肝癌亞力山大細(xì)胞PLC/PRF/5 細(xì)胞培養(yǎng)步驟說明書

一、細(xì)胞名稱：PLC/PRF/5

二、二、中文名稱：人肝癌亞力山大細(xì)胞

三、生長特性：  □ 貼壁     □ 懸浮       □ 半懸浮半貼壁

四、PLC/PRF/5 (人肝癌亞力山大細(xì)胞)生長條件：

五、組成：

六、人肝癌亞力山大細(xì)胞PLC/PRF/5 細(xì)胞培養(yǎng)步驟與注意事項

1. 細(xì)胞收到后建議在培養(yǎng)箱穩(wěn)定4小時左右再依據(jù)細(xì)胞密度，換液培養(yǎng)或傳代。

2. 如果細(xì)胞為貼壁細(xì)胞，而收到時呈懸浮或者部分懸浮的狀態(tài)，請將懸浮的細(xì)胞及時離心，加15%血清的*培養(yǎng)基到新的培養(yǎng)皿/瓶中繼續(xù)培養(yǎng)3天；同時原培養(yǎng)瓶中剩下的貼壁細(xì)胞更換為15%血清的*培養(yǎng)基，培養(yǎng)2-3天。若3天后細(xì)胞都沒有出現(xiàn)增殖而是繼續(xù)脫落死亡，請及時聯(lián)系實驗室，技術(shù)人員會跟進(jìn)解決。

3. 貼壁細(xì)胞生長緩慢：適當(dāng)提高血清濃度（zui高不超過20%），或可根據(jù)該細(xì)胞生長密度，考慮胰酶消化后，轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)瓶繼續(xù)培養(yǎng)。

4. 生長不均：貼壁細(xì)胞若出現(xiàn)生長不均，成島狀生長，可將細(xì)胞進(jìn)行消化，重新打散細(xì)胞，加入新鮮培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。

七、PLC/PRF/5 (人肝癌亞力山大細(xì)胞)常規(guī)培養(yǎng)傳代流程（請嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作）

1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS緩沖液潤洗細(xì)胞兩次，加1~2 ml 0.25% EDTA的胰酶消化（注意把握消化時間，通常控制在1~2min）。

2. 鏡下觀察消化情況，在細(xì)胞邊緣縮小，貼壁運動時（不建議消化到細(xì)胞漂浮）去掉胰酶，加6~8ml *培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，盡量把細(xì)胞層吹落、吹散。

3. 取出部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當(dāng)?shù)?培養(yǎng)基，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4. 注意培養(yǎng)基PH值變化情況，定期換液，待細(xì)胞密度達(dá)到70-80%時重復(fù)傳代操作或者凍存。

PLC/PRF/5 (人肝癌亞力山大細(xì)胞)特別注意：（如使用公共實驗室或初次接觸細(xì)胞培養(yǎng)，建議添加雙抗培養(yǎng)）

1. 收到細(xì)胞后請盡快更換為含10% FBS的新鮮培養(yǎng)基，切勿使用原瓶中運輸用培養(yǎng)基。

2. 如簽收時出現(xiàn)培養(yǎng)瓶壁破裂，漏液等情況請及時拍照并聯(lián)系實驗室。

3. 細(xì)胞任何售后問題，均需拍照存檔并及時聯(lián)系客服。PH-pc-r034    肝動脈平滑肌細(xì)胞    Hepatic artery smooth musclecells    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS