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如何應(yīng)對植物組培過程中的污染問題?新型高效方法值得推薦

來源:北京西美杰科技有限公司   2019年12月06日 10:24  

       植物組織培養(yǎng)是20世紀初發(fā)展起來的一門新興技術(shù),隨著這項技術(shù)的日益完善,其應(yīng)用也越來越廣泛。但是在組織培養(yǎng)過程中,常常會遇到污染問題使實驗無法進行下去,甚至導(dǎo)致整個實驗失敗,給科研和工廠化生產(chǎn)帶來損失。

       污染是指在植物組織培養(yǎng)過程中,培養(yǎng)基和培養(yǎng)材料滋生雜菌,終導(dǎo)致培養(yǎng)失敗的現(xiàn)象。常見的污染類型包括由霉菌引起的真菌性污染、多由外植體帶菌引起的細菌性污染長期多次繼代引起的內(nèi)生菌污染以及農(nóng)桿菌污染等。面對植物組培污染問題,我們通常采取在培養(yǎng)基中加入適量的抗生素(如青霉素、鏈霉素、氯霉素等)來抑菌。但是抗生素一般不穩(wěn)定,遇酸、堿或加熱都易分解而失去活性。而且單一抗生素抑菌容易產(chǎn)生抗藥性,一旦停止使用,污染率就會顯著上升。同時,高濃度的抗生素會影響植物的生長。

圖片1

       為解決問題,我們推薦專業(yè)植物組培高效廣譜性抗菌劑PPM™,它可以有效預(yù)防和清除由于空氣、滅菌不*、交叉污染、外植體消毒等各種原因?qū)е碌闹参锝M培苗的真菌、細菌、內(nèi)生菌和農(nóng)桿菌污染??梢约尤肱囵B(yǎng)基高溫滅菌;而且在合理使用劑量下,不會對植物的生長產(chǎn)生任何影響。

使用方法如下:

?      常規(guī)污染預(yù)防用量:

一般推薦使用濃度為0.05%-0.2%(1L培養(yǎng)基中加入0.5-0.75ml PPM™)愈傷增殖, 器官形成,胚性組織發(fā)育等使用濃度0.05%-0.075%。

2、      種子:PPM™不推薦用于直接處理含有大量的細菌或真菌孢子的種子滅菌對于種子離體萌發(fā),建議先采用傳統(tǒng)方法消毒,然后置于含 2-3%PPM™的全培養(yǎng)基礎(chǔ)鹽溶液中輕輕攪拌4-12小時,此過程千萬不能添加Tween20和調(diào)節(jié)pH,處理完成以后直接插入含有 PPM™(草本植物0.05-0.1%,木本植物0.2%)的培養(yǎng)基里進行培養(yǎng)。

?      塊莖,球莖和鱗狀物的觀賞植物樣本:將其整體放入消毒劑中攪拌消毒處理以后, 用水沖洗干凈,將材料切成薄片,置于含 4-5%PPM™的全培養(yǎng)基礎(chǔ)鹽培養(yǎng)液中,輕輕攪拌4-12小時,此過程千萬不能添加Tween20 和調(diào)節(jié)pH,處理完成以后無需沖洗直接插入含有 0.1-0.2%的PPM™的培養(yǎng)基里進行培養(yǎng)。

3、      將材料浸泡在水中持續(xù)攪拌處理(松軟組織攪拌1小時,硬實組織攪拌2小時)

?      無需沖洗,將處理過的材料直接加入到培養(yǎng)基中即可。對于真菌污染,可在培養(yǎng)基中加入適當濃度的PPM™。對于真菌細菌混合性污染,建議在培養(yǎng)的首月的培養(yǎng)基中加入0.05%-0.2%的PPM™

4、      將污染的材料至于流水中用軟刷刷洗,然后置于含50% PPM™的無菌水溶液中攪拌5-15分鐘;對于細菌或者混合性污染,建議使用 100% PPM™與 0.6g/L 的檸檬酸無菌水溶液按 1:1 混合的低 pH(2.8-3.2)的酸性溶液處理

?      農(nóng)桿菌的去除

共培養(yǎng)以后,將樣本用無菌水清洗,然后將樣本浸沒在 100% PPM™(補充4X的培養(yǎng)基鹽溶液)中處理2分鐘,取出后用無菌紙吸干后并置于常用抗性培養(yǎng)基中培養(yǎng),3 周后,更換到只含有0.05%-0.075% PPM™(無常用抗生素)的培養(yǎng)基中培養(yǎng)。

圖片2

?      在所有 PPM™消毒處理外植體的過程中,盡量保證容器的體積足夠大,并使外植體材料所有面積與含PPM的處理溶液充分接觸,以保證消毒效果;

?      50% PPM™ 的處理溶液可以重復(fù)使用但是不推薦,因為使用次數(shù)和效果受外植體的體積與接種密度的影響。將50% PPM™的處理溶液保存在4ºC可適當延長其活性,一般可使用不超過10次。如果必要,建議配制2份50% PPM™溶液,一份用于外植體消毒內(nèi)生菌污染,另一份用于消除“培養(yǎng)過程中”的輕度污染材料搶救,第二份溶液在每次處理過后需要用 0.2mm濾器過濾

?      使用方法如下:

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