流式細(xì)胞儀檢測(cè)A172細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)報(bào)告實(shí)驗(yàn)報(bào)告書
流式細(xì)胞儀檢測(cè)A172細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)報(bào)告實(shí)驗(yàn)報(bào)告書
一、 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑
表格一:實(shí)驗(yàn)儀器
儀器 | 廠家 | 型號(hào) |
細(xì)胞培養(yǎng)箱 | Thermo Scientific | HERA cell CO2 |
低溫高速離心機(jī) | 64R | BECKMAN |
流式細(xì)胞儀 | BD | FACS Calibur |
表格二:試劑
試劑 | 廠家 |
DMEM 培養(yǎng)液 | Hyclone |
胎牛血清 | Gibco |
無(wú)鈣、鎂 PBS 7.4 (0.1 M) | 自配 |
Annexin V-FITC/PI 凋亡檢測(cè)試劑盒 | BD |
二、 實(shí)驗(yàn)步驟
細(xì)胞培養(yǎng) 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的 A172 細(xì)胞,按 1*105個(gè)/mL 以 1mL 體積接種于 6 孔板內(nèi)。無(wú)抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng)過(guò)夜,到轉(zhuǎn)染時(shí)使細(xì)胞達(dá)到 70%的匯合率。
轉(zhuǎn)染
將 12.5uL siRNA 溶于 387.5uL 無(wú)血清的 DMEM 中,混合均勻。
將 12.5uL Lipofectamine 2000 溶于 387.5uL 無(wú)血清的 DMEM 中,混合均
勻。在室溫下孵育 5 分鐘。
將上述兩種混合物混合(總體積 800uL),輕輕混合均勻在室溫下孵育
20 分鐘形成復(fù)合物。
在 6 孔板中每孔加入 800uL 復(fù)合物。十字法混合均勻。
細(xì)胞在 37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 6h 后棄上清液,并加入 10%胎牛血
清的 DMEM 培養(yǎng)液。
染色 消化并離心收集細(xì)胞(1000rpm/min)后棄上清,加入無(wú)鈣、鎂 PBS 1mL 洗
2 次,離心后棄上清。分別加入 100μL binding buffer、5μL Annexin V-FITC 和 5μL
PI 溶液,室溫避光孵育 15min。
4. 檢測(cè)
加入 400μL binding buffer 后以標(biāo)準(zhǔn)程序用流式細(xì)胞儀檢測(cè),汞激發(fā)波長(zhǎng)
488nm,計(jì)數(shù) 1 萬(wàn)個(gè)細(xì)胞。
三、 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
省略
相關(guān)產(chǎn)品
免責(zé)聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來(lái)源:化工儀器網(wǎng)”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品,未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的,應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用,并注明“來(lái)源:化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者,本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來(lái)源(非化工儀器網(wǎng))的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對(duì)其真實(shí)性負(fù)責(zé),不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí),必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來(lái)源,并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問(wèn)題,請(qǐng)?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。