DMEM培養(yǎng)基(添加NaHCO3 1.5g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%
氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%
溫度：37攝氏度

NIH-3T3-LUC小鼠成纖維標(biāo)記細(xì)胞-熒光酶描述

細(xì)胞生長：貼壁生長
細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣
細(xì)胞數(shù)量：1×106個
細(xì)胞傳代：當(dāng)細(xì)胞生長至80%或80%以下匯合時即可傳代，切勿達(dá)到匯合；1:3~1:6傳代，每周2次
細(xì)胞特性：NIH/3T3是從NIH Swiss小鼠胚胎培養(yǎng)物中建立的高度接觸性抑制的連續(xù)傳代細(xì)胞株。為了培育在形態(tài)學(xué)特征上更適合于進(jìn)行轉(zhuǎn)化分析的亞株，建立的NIH/3T3細(xì)胞株又進(jìn)行了5輪以上亞克隆。該細(xì)胞株對肉瘤病毒的轉(zhuǎn)化灶形成和白血病病毒的繁殖高度敏感，對DNA轉(zhuǎn)化及轉(zhuǎn)染研究十分有用。鼠痘病毒陰性。
細(xì)胞純度：92％
細(xì)胞活力：88％（Viability by Trypan Blue Exclusion）
細(xì)胞檢測：細(xì)胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌
細(xì)胞凍存：液氮凍存（基礎(chǔ)培養(yǎng)基+10%DMSO+20%FBS）
細(xì)胞運輸：干冰運輸（1 Vial）或活細(xì)胞運輸（T-25 flasks）
細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療

貼壁細(xì)胞與懸浮細(xì)胞培養(yǎng)過程中分別應(yīng)該注意的事項：

一、貼壁細(xì)胞
1.用75%酒精噴灑整個瓶消毒，將其平躺置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行2-3小時的緩沖，.然后置于無菌操作臺，打開瓶口，將其中的培養(yǎng)液去掉，再往其中加入5-6mL新鮮培養(yǎng)基并置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，根據(jù)細(xì)胞生長狀況及培養(yǎng)基顏色變化對其進(jìn)行換液以及傳代；
2.待細(xì)胞長滿瓶底面積80%-90%，需要對其進(jìn)行傳代，di一次傳代比例為1:2。
3傳代步驟：將0.25%含EDTA胰酶置于37°預(yù)熱，倒掉培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，往培養(yǎng)瓶中加入1mlPBS，輕晃洗滌后棄去。往瓶中加1ml預(yù)熱好的胰酶，置于37°孵育消化（di一次消化需時常取出置于顯微鏡下觀察，以顯微鏡下細(xì)胞觸角回收變圓、輕拍瓶壁見細(xì)胞脫落為*消化時間，記錄*消化時間，以便于下次消化），消化好后加入1ml*培養(yǎng)基終止消化。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細(xì)胞，使之*脫落，然后收集細(xì)胞懸液，1200rpm離心3min，棄上清，加入*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，進(jìn)行傳代。

二、懸浮細(xì)胞
1.用75%酒精噴灑整個瓶消毒，然后置于無菌操作臺，打開瓶口，輕輕吹打后，將其中的細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到離心管中，然后1200rpm離心3min，去上清；
2.將離心好的細(xì)胞轉(zhuǎn)移至T-25瓶中，并加入5-6mL新鮮培養(yǎng)基，然后將其置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，根據(jù)細(xì)胞生長狀況及培養(yǎng)基顏色變化對其進(jìn)行換液（離心后去舊液，加入新鮮培養(yǎng)基）；
3.顯微鏡觀察細(xì)胞數(shù)目比較多時，對其進(jìn)行傳代，di一次傳代比例為1:2（離心后平均分成兩瓶培養(yǎng)）。

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