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HuH-7細(xì)胞|人肝癌細(xì)胞HuH-7 培養(yǎng)方法

來(lái)源:上海琛藝實(shí)業(yè)有限公司   2019年12月11日 11:30  

(HuH-7細(xì)胞)人肝癌細(xì)胞分化的特點(diǎn)主要可以概括成三點(diǎn):

 

① 持久性:細(xì)胞分化貫穿于生物體整個(gè)生命進(jìn)程中,在胚胎期達(dá)到*程度

 

② 穩(wěn)定性和不可逆性:一般來(lái)說(shuō),分化了的細(xì)胞將一直保持分化后的狀態(tài),直到死亡

 

③ 普遍性:生物界普遍存在,是生物個(gè)體發(fā)育的基礎(chǔ)

 

(HuH-7細(xì)胞)人肝癌細(xì)胞

 

培養(yǎng)條件

 

DMEM-H10%FBS

 

細(xì)胞生長(zhǎng):貼壁生長(zhǎng)

 

細(xì)胞形態(tài):上皮樣

 

細(xì)胞數(shù)量:1×106個(gè)細(xì)胞數(shù)

 

細(xì)胞傳代:1:2傳代消化3-5分鐘3天內(nèi)可長(zhǎng)滿(mǎn)

 

細(xì)胞特性:據(jù)說(shuō)產(chǎn)甲胎蛋白胰酶α抗體血漿銅藍(lán)蛋白纖維蛋白原纖維粘連蛋白等

 

細(xì)胞純度:92%

 

細(xì)胞活力:89%(ViabilitybyTrypanBlueExclusion)

 

HuH-7細(xì)胞|人肝癌細(xì)胞HuH-7 培養(yǎng)方法

細(xì)胞檢測(cè):細(xì)胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌

 

細(xì)胞凍存:液氮凍存(基礎(chǔ)培養(yǎng)基+10%DMSO+20%FBS)

 

細(xì)胞運(yùn)輸:干冰運(yùn)輸(1Vial)或活細(xì)胞運(yùn)輸(T-25flasks)

 

細(xì)胞用途:只可用于科研不可用于臨床診斷和治療

培養(yǎng)方法

傳代方法 將舊培養(yǎng)液吸除,PBS清洗兩遍后,加入6mL(/100mm皿)胰酶,在顯微鏡下觀察,期間禁止搖晃培養(yǎng)皿,細(xì)胞剛有脫落時(shí),則吸除大部分胰酶,留約0.5mL,移至培養(yǎng)箱消化,約5min取出。傳代用12mL CM1-1培養(yǎng)液終止消化,輕輕吹打均勻細(xì)胞,后可分3~6皿培養(yǎng);

生長(zhǎng)條件 37℃,5%CO2,CM1-1培養(yǎng)液。CM1-1培養(yǎng)液:90%DMEM-H+10%FBS。DMEM-H:DMEM高糖培養(yǎng)液,含谷氨酰胺,含丙酮酸鈉。

生長(zhǎng)特性 高密度時(shí),細(xì)胞連城一片,細(xì)胞之間間隙不明顯

存儲(chǔ)條件 凍存則用6mL凍存液(90%FBS+10%DMSO)終止消化,吹打均勻,分為6支凍存管,用程序降溫盒于-80℃凍存,過(guò)夜移至液氮中保存

 

(HuH-7細(xì)胞)人肝癌細(xì)胞可以用大量次培養(yǎng)基培養(yǎng),來(lái)自sciencell、ICLC、ATCC等細(xì)胞庫(kù)。從胚胎提取,于原代(或二代)凍存在液氮中,一律采用干冰運(yùn)輸。客戶(hù)收到細(xì)胞后,從干冰中取出放入液氮中保存,待實(shí)驗(yàn)安排好后,解凍后即可以進(jìn)行復(fù)蘇培養(yǎng)。

生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)

 

細(xì)胞來(lái)源: 從ATCC/中科院/協(xié)和醫(yī)院等地引進(jìn)

培養(yǎng)條件: 培養(yǎng)基:1640 +10%FBS(推薦德國(guó)BI 04-002-1A

優(yōu)等胎牛血清)

氣相:空氣95%,二氧化碳5%

溫度:37℃

培養(yǎng): 一、貼壁細(xì)胞

1.用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒,將其平躺置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行2-3小時(shí)的緩沖,.然后置于無(wú)菌操作臺(tái),打開(kāi)瓶口,將其中的培養(yǎng)液去掉,再往其中加入5-6mL新鮮培養(yǎng)基并置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀況及培養(yǎng)基顏色變化對(duì)其進(jìn)行換液以及傳代;

2.待細(xì)胞長(zhǎng)滿(mǎn)瓶底面積80%-90%,需要對(duì)其進(jìn)行傳代,di一次傳代比例為1:2。

3傳代步驟:將0.25%含EDTA胰酶置于37°預(yù)熱,倒掉培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,往培養(yǎng)瓶中加入1mlPBS,輕晃洗滌后棄去。往瓶中加1ml預(yù)熱好的胰酶,置于37°孵育消化(di一次消化需時(shí)常取出置于顯微鏡下觀察,以顯微鏡下細(xì)胞觸角回收變圓、輕拍瓶壁見(jiàn)細(xì)胞脫落為*消化時(shí)間,記錄*消化時(shí)間,以便于下次消化),消化好后加入1ml*培養(yǎng)基終止消化。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細(xì)胞,使之*脫落,然后收集細(xì)胞懸液,1200rpm離心3min,棄上清,加入*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,進(jìn)行傳代。

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(HuH-7細(xì)胞)人肝癌細(xì)胞是生物體結(jié)構(gòu)和功能的基本單位。

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