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EPC細胞免疫熒光實驗報告

來源:上海創(chuàng)凌生物科技有限公司   2019年12月11日 13:41  

一、 實驗儀器與試劑

表格一:實驗儀器

儀器

廠家

型號

細胞培養(yǎng)箱

Thermo Scientific

HERA cell CO2

 激光共聚焦顯微鏡

Leica

TCS SP5

表格二:試劑

試劑

廠家

細胞培養(yǎng)基

Gibco

PBS (0.1 M, pH 7.4)

自配

4 %多聚甲醛溶液

索來寶

BSA

Sigma

Triton-x-100

生工生物

FITC 標(biāo)記羊抗兔熒光二抗

Santa Cruz

DAPI

碧云天

二、 實驗步驟

制作細胞爬片,根據(jù)實驗方案進行加樣操作;

反應(yīng) 24h 后,棄原有培養(yǎng)液, PBS 洗 1 次;

4%的多聚甲醛 4 度固定 15 分鐘,PBS 洗 2 次,5 分鐘/次;

4. 加入 0.1%的 Triton-x-100,室溫孵育 15 分鐘;

5. PBS 洗 3 次,5 分鐘/次;

6. 10%BSA 封閉 30 分鐘;

加入一抗 50μL(稀釋度為 1:100),4℃過夜孵育;

第二天復(fù)溫 30min,PBS 洗 3 次,5 分鐘/次;

每組分別加入 FITC 標(biāo)記羊抗兔熒光二抗 50μL(稀釋度為 1:500),37℃培養(yǎng) 30 分鐘;

PBS 洗 3 次,每次 5 分鐘;

11. DAPI 染色 5 分鐘;

PBS 洗 3 次,每次 5 分鐘;

在激光共聚焦顯微鏡上觀察(使用 405nm 和 488nm 的激發(fā)光源進行熒光檢測)。  

三、 實驗結(jié)果

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