EPC細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)報(bào)告
一、 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑
表格一:實(shí)驗(yàn)儀器
儀器 | 廠家 | 型號(hào) |
細(xì)胞培養(yǎng)箱 | Thermo Scientific | HERA cell CO2 |
激光共聚焦顯微鏡 | Leica | TCS SP5 |
表格二:試劑
試劑 | 廠家 |
細(xì)胞培養(yǎng)基 | Gibco |
PBS (0.1 M, pH 7.4) | 自配 |
4 %多聚甲醛溶液 | 索來寶 |
BSA | Sigma |
Triton-x-100 | 生工生物 |
FITC 標(biāo)記羊抗兔熒光二抗 | Santa Cruz |
DAPI | 碧云天 |
二、 實(shí)驗(yàn)步驟
制作細(xì)胞爬片,根據(jù)實(shí)驗(yàn)方案進(jìn)行加樣操作;
反應(yīng) 24h 后,棄原有培養(yǎng)液, PBS 洗 1 次;
4%的多聚甲醛 4 度固定 15 分鐘,PBS 洗 2 次,5 分鐘/次;
4. 加入 0.1%的 Triton-x-100,室溫孵育 15 分鐘;
5. PBS 洗 3 次,5 分鐘/次;
6. 10%BSA 封閉 30 分鐘;
加入一抗 50μL(稀釋度為 1:100),4℃過夜孵育;
第二天復(fù)溫 30min,PBS 洗 3 次,5 分鐘/次;
每組分別加入 FITC 標(biāo)記羊抗兔熒光二抗 50μL(稀釋度為 1:500),37℃培養(yǎng) 30 分鐘;
PBS 洗 3 次,每次 5 分鐘;
11. DAPI 染色 5 分鐘;
PBS 洗 3 次,每次 5 分鐘;
在激光共聚焦顯微鏡上觀察(使用 405nm 和 488nm 的激發(fā)光源進(jìn)行熒光檢測)。
三、 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
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